人外周血Treg

刘qhd · 发表于 2018-5-12 10:07:19

取外周抗凝血100ul,加入20ulCD45,CD4抗体，避光室温抚育15分钟，2mi溶血素裂红，裂解10分钟，500g离心，倒上清。加入1mi流失缓冲液，离心，弃上清。加入1mi1*FIX/Perm 4度避光45分钟，之后步骤按BD专用破膜说明书进行。上机结果如图，专业老师说FOXP3有问题或没标上，不知原因，请老师帮忙分析下。

niwanmao · 发表于 2018-5-12 16:09:13

十字门往下移，有阳性群的，只不过分的不是很开。不是抗体问题就是破膜效率问题。
如果有需要，我们的MemMagician破膜剂可以破核膜，可以试用看看，联系流式中文网团队张鸿， 13868761667，zhanghong@flowcyto.cn即可

刘qhd · 发表于 2018-5-12 16:55:00

倪老师，我这样做标记可以吗？是标CD45CD4FOXP3还是CD4CD25FOXP3更好呢？

niwanmao · 发表于 2018-5-13 11:35:38

刘qhd 发表于 2018-5-12 16:55
倪老师，我这样做标记可以吗？是标CD45CD4FOXP3还是CD4CD25FOXP3更好呢？

有foxP3的话，两者问题都不太大。

刘qhd · 发表于 2018-5-14 14:44:55

老师，你在帮忙看一下。CD45Percp,CD4 FITC,FOXP3APC,结果怎么又是这样啊

niwanmao · 发表于 2018-5-14 22:18:48

刘qhd 发表于 2018-5-14 14:44
老师，你在帮忙看一下。CD45Percp,CD4 FITC,FOXP3APC,结果怎么又是这样啊

只圈淋巴细胞门，然后显示CD4和foxP3看看。

刘qhd · 发表于 2018-5-18 20:50:31

又做了一次，标记CD4FITC,CD25PE，FOXP3APC,由于电脑太老了，导不出原始数据，请老师帮忙看下，FOXP3一点都没有，一共做了4管，CD4CD25都能标上，FOXP3都没有

刘qhd · 发表于 2018-5-18 20:56:17

还是因为我设门有问题呢？

niwanmao · 发表于 2018-5-21 09:21:57

刘qhd 发表于 2018-5-18 20:56
还是因为我设门有问题呢？

另一个帖中已回答。另外，从上面这个图中看出，你目前的红细胞裂解效果不好，到时候MemMagician测试好之后，将FCS文件发给我们张老师即可。

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[流式相关软件] 人外周血Treg