胞内染色时T细胞标记和抗CD3添加

holmes27

请教各位老师关于T细胞检测的问题，如果用磁珠分选出naive CD4 T细胞，与DC共培养，检测胞内细胞因子时用CD4标记T细胞，那DC表面低表达的CD4会不会有影响？论坛里倪老师建议的直接染胞内CD4的方法有人尝试过吗？如果用反向标CD3+CD8-的方法，对于已经纯化的naive CD4 T细胞，可以选用直接标记CD3吗？
另外T细胞增殖实验中，如果体系里存在APC，是不是就没有必要加CD28了，只加anti-CD3就可以？我看一些文献中只用到了CD3，还有相当一部分是用的可溶性CD3直接加到培养基中。我想知道在APC存在的情况下，是不是包被抗CD3与加可溶性CD3的作用相当？还是也要看具体反应？有没有站友在做相关实验，经验能否分享一下。谢谢！

niwanmao

1、T细胞可用CD3，DC可用CD80，作为特异性圈选标记。对于T细胞中亚群的区分，CD4和CD8建议都用上，并且加上CD62L和CCR7等标记，区分出T细胞的初始、记忆等状态。
2、理论上有APC应该就能激活T细胞吧，最多加点细胞因子维持两者生存，CD3和CD28应该都不能加才对啊。

holmes27

niwanmao 发表于 2018-6-19 22:26
1、T细胞可用CD3，DC可用CD80，作为特异性圈选标记。对于T细胞中亚群的区分，CD4和CD8建议都用上，并且加上 ...

谢谢倪老师回复！
我测了一下moDC上的CD4表达有百分之六七十，很高了。那么与T细胞共培养时通过CD4来标记T细胞应该是不准确的，不知文献中为什么大都还是用CD4标记？我觉得native CD4 磁珠分选的T细胞标记CD3+CD4或只标记CD3就行了吧，下次分选后验证一下看看效率。
加CD3这个，可能是为了提高检测灵敏度吧，有些条件下只加APC来测活化可能空白组就不明显。这是我的个人想法，不知对不对。