肿瘤病人外周血 多色流式设计

dayemulan1988

版主,您好:
         我从学习流式细胞术以来一很喜欢你，感觉你很专业，也很热心，希望能给我一些指导。
我最近是要通过分析肿瘤患者的外周血，来看肿瘤免疫的相关内容。因为是第一次看，机器可以跑18色，所以想尽可能摸得全面一点。
下面是我抗体的选择，和对应的群组分群，你可以帮我看一下，我的选色、搭配、还有检测的marker可以吗？
非常感谢！
                                                               
                                                               
        指标           货号        荧光        规格        品牌        品名
        CD3           BUV737        100T        BD        BD Horizon™ BUV737 Mouse Anti-Human CD3
        CD4           BUV496        100T        BD        BD Horizon™ BUV496 Mouse Anti-Human CD4
        CD66B       BB515        100T        BD        BD Horizon™ BB515 Mouse Anti-Human CD66b
        CD25         PE-Cyanine7                ebioscience        已有抗体
        FOXP3       EFLUOR 450        100T        ebioscience        FOXP3 Monoclonal Antibody (PCH101), eFluor 450, eBioscience™
        CD19        PerCP-Cyanine5.5                ebioscience        已有抗体
        CD56         BV786        100T        BD        BD Horizon™ BV786 Mouse Anti-Human CD56
        CD8           bv605        100T        BD        BD Horizon™ BV605 Mouse Anti-Human CD8
        HLA-DR      BV510        50T        BD        BD Horizon™ BV510 Mouse Anti-Human HLA-DR
        CD33         APC-eFluor 780                ebioscience        已有抗体
        CD14           AF700        100t        BD        BD Pharmingen™ Alexa Fluor® 700 Mouse Anti-Human CD14
        CD15           BV650        100t        BD         BD Horizon™ BV650 Mouse Anti-Human CD15
        CD68            BV711        50T        BD        BD Horizon™ BV711 Mouse Anti-Human CD68
        CD117(c-kit)   PE                ebioscience        已有抗体
        CXCR1            PE-CY5        100T        BD        BD Pharmingen™ PE-Cy™5 Mouse Anti-Human CD181
        CXCR2            APC        100T        BD         BD Pharmingen™ APC Mouse Anti-Human CD182
        cd45              BUV395        100t        BD        BD Horizon™ BUV395 Mouse Anti-Human CD45
      CD11B               APC-eFluor 780                ebioscience        已有抗体        0

               
                                                               
CD4+ Tcell:         CD3+CD4+                                                        
CD8+ Tcell:        CD3+CD8+                                                                                                            
Treg:        CD4+CD25+FOXP3+                                                        
激活的Treg：        CD4+CD25+HLADR+                                                                                                                     
B cell：        CD3-CD19+                                                        
NK cell：        CD3-CD19-CD56+(潘)        CD3-CD16+CD56+(唐)                两种分组方案                                
NKT cell：        CD3+CD56+CD16+                                                        
DC cell：        CD3-CD19-HLADR+                                                                                                                                                                                
MDSC：        CD33+HLADR+CD11b+        CD14 CD15                                                                                                        
TAM：        CD3-CD19-CD68+                                                                                                               
TAN：        CD11b+CD15hiCD66b+        CXCR1、CXCR2                                                
                                       
                                                               

niwanmao

MDSC的表型描述的不太对，应该是HLA-DR－
NK用唐的那个。
活化Treg应该是在Treg表型基础上，加HLA-DR＋


至于配色，18色的配色难度会很大，目前的方案你可以先试试，还是需要根据实际检测效果进行微调的。

dayemulan1988

niwanmao 发表于 2018-6-20 14:11
MDSC的表型描述的不太对，应该是HLA-DR－
NK用唐的那个。
活化Treg应该是在Treg表型基础上，加HLA-DR＋

谢谢老师专业的回答，我还有个问题想请教，就是如果NK用唐的那个，18色就不够了，销售建议我是 只能把CD45这个大的marker去掉，如果是看外周血的话CD45扔掉的话问题大吗？

niwanmao

dayemulan1988 发表于 2018-6-20 14:27
谢谢老师专业的回答，我还有个问题想请教，就是如果NK用唐的那个，18色就不够了，销售建议我是 只能把CD4 ...

用唐那个，还不如去掉CD16，因为CD56－CD16＋的情况还是非常少的。

dayemulan1988

niwanmao 发表于 2018-6-20 15:56
用唐那个，还不如去掉CD16，因为CD56－CD16＋的情况还是非常少的。

老师，你的意思是CD45还是很重要的，不能舍弃，而NK就用CD56就差不多了，所以CD16不要也可以，是吗