淋巴细胞CD45染色必要吗

yxzxlmlf

如题，请问我做大鼠的淋巴细胞流式染色，一定要染CD45吗？直接从FSC-SSC找到淋巴细胞不行吗？谢谢！

ghqiu09

yxzxlmlf 发表于 2018-6-26 19:48
好的，谢谢您的回答！我还有一个问题请教下，我做大鼠的淋巴细胞，比如CD3抗体是mouse anti-rat CD3,那用 ...

如果只是分析淋巴细胞的话，我觉得没什么必要封闭，一个是T细胞不表达FcR，另外一个是现在的抗体特异性都比较好，像CD3CD4CD8CD45这些特别常用的抗体，封闭不封闭都差不多。印象中，有一次师姐做细胞纯化的时候，分小鼠的细胞用的是
兔？还是马血清，不明白为什么，不过既然是封闭，那也只是封闭非蛋白部位，应该都差不多吧。

ghqiu09

最好是有的，因为这样的话，后面的一些数据比例会比较稳定。比如血液样品，每次破红的效果不一样，导致参在淋巴细胞位置里的细胞也不一样，造成了后面比例的变化。但我以前经常做的脾脏和淋巴结的样品，从来也不染CD45，结果也还行。

yxzxlmlf

ghqiu09 发表于 2018-6-26 14:59
最好是有的，因为这样的话，后面的一些数据比例会比较稳定。比如血液样品，每次破红的效果不一样，导致参在 ...

好的，谢谢您的回答！我还有一个问题请教下，我做大鼠的淋巴细胞，比如CD3抗体是mouse anti-rat CD3,那用来封闭FcR是用小鼠的血清吗？可以不封闭么？

niwanmao

yxzxlmlf 发表于 2018-6-26 19:48
好的，谢谢您的回答！我还有一个问题请教下，我做大鼠的淋巴细胞，比如CD3抗体是mouse anti-rat CD3,那用 ...

可以购买商品化的fc block（Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32）比较好。