SD大鼠外周血T细胞亚群分析

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分析SD大鼠外周血中T细胞亚群（Th1，Th2，Th17，Treg），拟用流式抗体CD3、CD4、CD8、CD25、Foxp3、IL-17、IL-4、IFN-γ；本人刚接触流式相关实验，虽然看了论坛中很多相关的帖子，但还是有一些疑问：

（1）刺激剂中PMA会使CD4下调（用了较强的荧光素PE-CY7），对实验还会有影响吗？

（2）是否需要用死活染料？

（3）是否加FcR Block就不用设置同型对照了？是否需要设置荧光扣除对照？

（4）样本数较多，是否每天设置一组单染管就可以了，不用每个样本都做单染管吧？

（5）文献中大多用人/小鼠的淋巴细胞，如果体外培养大鼠PBMC/T细胞进行实验，检测化合物对细胞增殖的影响，激活试剂如何选择（ConA, PHA+PMA,PMA+IL2还是anti-CD3+anti-CD28）？

niwanmao

1、下调后，分群还是可以分开，问题不大。
2、最好用死活染料。
3、用了Fc block，可以取代以前的同型。如果是多色，还是要用FMO
4、一组单染管即可。而且样本来源一致，不同天也可以用同一组。
5、一般最经典的还是PMA＋离子霉素，最后用Brefeldin阻断。