CAR-T或TCR-T表型检测

wjd850801

niwanmao 发表于 2020-5-26 11:08
首先要检测出CAR-T细胞，方法很多，目前认为特异性最高的是用标记了荧光素的靶抗原去结合。
其次，检测出 ...

谢谢倪老师

wjd850801

niwanmao 发表于 2020-5-26 11:08
首先要检测出CAR-T细胞，方法很多，目前认为特异性最高的是用标记了荧光素的靶抗原去结合。
其次，检测出 ...

使用了荧光标记的靶抗原，还需要再加一个CD3吗？

niwanmao

wjd850801 发表于 2020-5-26 11:43
使用了荧光标记的靶抗原，还需要再加一个CD3吗？

需要的。

120971944

检测CAR（阳性率）真的不太好检测，因为CAR这个抗原受体，每个公司的CAR-T产品的CAR是不一样的，与之完全对应的检测抗体根本就没有啊，这不像细胞本身就存在的抗原如CD3什么的很多试剂公司的产品都能用，检测结果差不多。
CART的就不行了，用过几家的，都检测不出来。
是CAR+阳性率检测确实是一个难题，大多采用荧抄光二抗来检测，操作麻烦，袭灵敏度不高，特异性不好，分群不明显。

毛豆24821

niwanmao 发表于 2020-5-26 11:08
首先要检测出CAR-T细胞，方法很多，目前认为特异性最高的是用标记了荧光素的靶抗原去结合。
其次，检测出 ...

请教既然有荧光素的抗原，为什么还要绝对计数？

niwanmao

毛豆24821 发表于 2020-6-3 09:51
请教既然有荧光素的抗原，为什么还要绝对计数？

抗原结合CAR，是为了检测出CAR-T细胞。
只有检测出CAR-T细胞，再进行绝对计数计算，这是为了确定细胞数量。

毛豆24821

niwanmao 发表于 2020-6-3 14:11
抗原结合CAR，是为了检测出CAR-T细胞。
只有检测出CAR-T细胞，再进行绝对计数计算，这是为了确定细胞数量 ...

所以是目前正常检测CAT-T细胞，都是希望能够明确到绝对数量的啊？是因为CAR-T占比太少吗？
另外确认下靶抗原的定义，例如CAR是anti-CD20，那么靶抗原是标记了荧光素的CD20蛋白？
120971944战友提到的荧光二抗是指anti-CD20的二抗，即针对FC端的anti-IgG吗？

niwanmao

毛豆24821 发表于 2020-6-3 14:41
所以是目前正常检测CAT-T细胞，都是希望能够明确到绝对数量的啊？是因为CAR-T占比太少吗？
另外确认下靶 ...

生产CAR-T会有需要计算绝对数，因为要回输，需要计算回输数量。
总细胞数*比例也可以，但是属于双平台计数，相对单平台计数稍逊一筹。

靶抗原的理解是对的，CAR-T的检测方案有多种，详见前段时间编译的综述：https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8479-1-1.html