CFSE法测细胞增殖

于小鱼0516

最近在做CFSE检测CD3 T细胞增殖情况，实验结果不确定如何圈门分析，向各位老师请教一下，非常感谢！
一、实验步骤
1. 复苏CD3T细胞，直接第三天后上机检测亚群。结果如图1.
2. 使用CFSE，每10^6细胞，加入1 mLCFSE稀释液分别选择浓度为2.5uM，5uM，10uM。37℃20分钟后，用预冷的10%FBS 1640培养基终止，离心去上清，用培养基洗2次后，再加入新鲜培养基，接种细胞到6孔板中培养，每孔3ml培养基，2X10^6细胞。六孔板用Anti-CD3预包被，37℃包被2h。
3. 培养2天后，发现培养基变黄，换液一次。
4. 继续培养2天，取细胞，BD Callibur检测，每样本收1万细胞。结果如图2  全部都没有增殖，是我的条件哪里不对吗还是什么原因，希望大家指教一下谢谢。

于小鱼0516

0816是细胞亚群分析，0821是CD3刺激4天后的增殖结果图。

qscdawx

同问，之前我检测CD4+T cell的增殖也基本没有变化~

木石织梦

是不是要加点细胞因子，比如IL-2？不然细胞会死掉的吧。

BAT-038

两个问题，第一OKT3包被的浓度是多少？会不会少了？第二个问题，是否要加anti-CD28?

mybiosciences

1.可能染色时间过长，导致细胞中毒
2.建议加上死细胞排除染料染色可以参考附件

夏日清风

我在做实验的时候试验过浓度 2.5uM的CFSE浓度太高了，0.5uM就可以有很高的荧光强度，并且不影响细胞受刺激后的增值。