流式检测血小板活化及其与各类白细胞之间的相互作用

jqr946

各位老师们好，新手上路有几个问题，想请教一下，我最近在做一个全血染血小板，检测血小板聚集及其与各类白细胞之间的相互作用，看激动剂（ADP）使用前后，看不同组病人和正常人之间的差异，因为实验室目前没有人做过血小板的流式，所以条件什么的都是参照文献，和之前我在我们流式中文网上找到的一些方案，然后圈门什么的是师兄按照他习惯的圈外周血三个白细胞亚群来的，但是我现在有点困惑，因为我按照protocol来，并不能找到10^2-10^3直接的血小板群体，后来我就用CD41反圈才找到对应的血小板，想请教下我目前的染色图可以吗？（抗体：biolegend公司的Percp/Cy5.5-CD62P，BV510 CD41，FITC-CD42b，步骤：取全血100ul+2ul抗体（上述三种抗体各2ul）室温染色15min，2%多聚甲醛固定15min，裂红10分钟，两次洗涤后加200ulTyrode‘s buffer重悬上机检测）
各位老师走过路过的快来救救孩子吧，因为没有人指导我也不知道自己做的到底对不对

jqr946

自己顶希望有大大可以回复一下

niwanmao

血小板非常小，所以需要将FSC和SSC坐标均调节为Log才行。

jqr946

niwanmao 发表于 2018-9-10 08:46
血小板非常小，所以需要将FSC和SSC坐标均调节为Log才行。

谢谢大大回复!我有尝试过用log来调，但是这样子的话就没有血小板了，所有的细胞群都集中则在右侧，然后我就只能通过反圈来确定血小板在FSC和SSC中在哪个位置

niwanmao

jqr946 发表于 2018-9-22 10:04
谢谢大大回复!我有尝试过用log来调，但是这样子的话就没有血小板了，所有的细胞群都集中则在右侧，然后我 ...

如果在Log坐标下超出，可以将电压调下来，使血小板群位置在散点图中间部分比较合适。

jqr946

niwanmao 发表于 2018-9-22 10:39
如果在Log坐标下超出，可以将电压调下来，使血小板群位置在散点图中间部分比较合适。 ...

好的，谢谢大大！我下周再试试看

chymanhz

jqr946 发表于 2018-9-24 10:09
好的，谢谢大大！我下周再试试看

你把坐标改为log后用双指数显示看看

overcome1996

不理解为什么要同时标记CD41和CD42b。CD41是GPⅡb，CD42b是GPⅨ，两者的功能都是特异性识别血小板吧。从图上看，CD42b和CD41识别出来的血小板统计并无多大差异，一个9点多，一个10点多。CD41和CD42b双阳性也不能说明聚集吧，不懂为什么这样设计panel。

范晋波

全血做血小板，前侧向跟倪老实说的一样，要用对数模式才行，附件中这个就是血小板前侧向上机的图，希望有帮助~（右上角就是白细胞的位置，因为实验检测血小板，所以即使飞出坐标范围也不打紧）