半小时视频，帮你找出做好磷酸化流式的几个关键点

niwanmao

这是油管上的视频，主讲者是CellSignal技术支持，短短30分钟，言简意赅总结了磷酸化蛋白流式检测中的一些关键要点：
1、固定和破膜的方法选择：

2、抗体结合位点，可影响检测结果：


3、检测的时间点很重要：



4、三种染色方式的对比，优选中间这种：



5、有时候，当你发现表面标记不见了，两个解决方法，一是换另一克隆号的抗体，二是换固定和破膜剂：




如此有价值的内容，这视频得好好看看，视频如下（请在电脑端观看）：

Wlmedicine

incubation buffer , wash buffer 怎样影响流式结果？

hebiorange

倪老师，想问一下， 因为要看Treg 的 pSTAT5 signal, 要破两次膜， 那我这个 live/dead 什么时候染合适？ 看paper 都是在 stimulate 前，把 live/dead 染上，再进行体外刺激， 这样是有什么好处么？

dongfangyao

倪老师，其中有一点，视频中anti-CD3/28刺激后，流式还能用CD3抗体标记上
这一点，我在实际过程中做不到，用anti-CD3/28的抗体刺激PBMC后，CD3流式检测抗体就标记不上了

niwanmao

dongfangyao 发表于 2023-4-29 15:21
倪老师，其中有一点，视频中anti-CD3/28刺激后，流式还能用CD3抗体标记上
这一点，我在实际过程中做不到， ...

一般用plate-binding CD3/CD28，或者CD3/CD28 beads刺激。

可溶性直接刺激，是会导致结合不上，你在另一个帖子中提问，我回答了。