自带EGFP荧光的细胞流式检测问题

holmes27

请教大家，如果细胞被转进了带EGFP荧光的质粒，还能正常用流式检测各通道荧光吗？如果要检测的抗体荧光跟FITC存在补偿，能用未转染EGFP的一组细胞调补偿吗？感觉不太行啊。

期待各位老师的回复！

niwanmao

holmes27 发表于 2018-9-30 10:43
谢谢倪老师回复。我们的机器做不了BV，因为之前设计的是APC、PE、PE-Cy7和PerCP-Cy5.5（或APC-Cy7）四染 ...

不会有问题啊。
我明白了，你应该是理解错了，未转染但加上上述4个荧光素抗体，调节的是其它荧光素漏到EGFP通道的荧光，这管可以不需要做，因为EGFP不是你需要做的指标。
你如果要检测PE标记的指标，那么可做一管APC、PE-cy7、PerCP-cy5.5三个抗体标记EGFP转染细胞，这就是FMO对照，用这个，可以很好的设出EGFP以及其它三个抗体对PE通道的荧光渗漏。

咖喱爱吃鱼

我们这边是BD的流式仪，EGFP就是和FITC是一个通道，不能同时使用，你看看你自己机器的通道，如果是一个就不能，调任何补偿都没用

niwanmao

可以用FITC以外的其它通道，如果能选择到激发波长不同的最好，例如APC或BV系列。
其它通道与EGFP的补偿，可用未转染EGFP的细胞调节。不知道你为什么觉得不行？

holmes27

niwanmao 发表于 2018-9-30 09:23
可以用FITC以外的其它通道，如果能选择到激发波长不同的最好，例如APC或BV系列。
其它通道与EGFP的补偿，可 ...

谢谢倪老师回复。我们的机器做不了BV，因为之前设计的是APC、PE、PE-Cy7和PerCP-Cy5.5（或APC-Cy7）四染，听别的老师说带EGFP的细胞本身会对PE影响很大，补偿不好调，怕未转染的细胞可比性不强

holmes27

niwanmao 发表于 2018-9-30 10:50
不会有问题啊。
我明白了，你应该是理解错了，未转染但加上上述4个荧光素抗体，调节的是其它荧光素漏到EG ...

明白了！前面没转过来弯。非常感谢倪老师！