多克隆抗体 抗人纤维蛋白原

W3YC

我目前在做血小板表面抗体的分析，参考的原始文献里曾用一种多克隆抗体：抗人纤维蛋白原，对血小板进行了染色，但是文献里并未提及多克隆抗体如何设门，想请教倪老师和其他广大Flowers，谢谢！

niwanmao

你是准备分析血小板表面的纤维蛋白原结合量吧？那么就用FSC-LOG/SSC-log设门，圈中血小板区域，如果希望更准确，可再加上CD61设门。

W3YC

niwanmao 发表于 2018-11-3 09:32
你是准备分析血小板表面的纤维蛋白原结合量吧？那么就用FSC-LOG/SSC-log设门，圈中血小板区域，如果希望更 ...

倪老师，我是打算用这个抗体看血小板的激活情况，我试验之前空白对照的话，确实激活的血小板比未激活的血小板更高的表达 Anti-Fibrinogen，但是我们实验室之前也没有人用过多克隆的抗体，您知道多克隆抗体如何设门吗？我用的CD41a标记血小板

W3YC

niwanmao 发表于 2018-11-3 09:32
你是准备分析血小板表面的纤维蛋白原结合量吧？那么就用FSC-LOG/SSC-log设门，圈中血小板区域，如果希望更 ...

倪老师您看，图4是我画的血小板门，用CD41a和SSC，圈出了血小板
然后在标记FBG，就是抗纤维蛋白原，之前是空白标记，后面在十字门以上的就是激活和未加激活剂的血小板

niwanmao

W3YC 发表于 2018-11-3 10:19
倪老师您看，图4是我画的血小板门，用CD41a和SSC，圈出了血小板
然后在标记FBG，就是抗纤维蛋白原，之前 ...

多抗和单抗的设门原则是一样的，只是因为它结合的靶点多而已。
你这样的设置是合理的。如果在用EDTA抑制一下，就更能证实这个结合的特异性了，参考2006年的一篇文章：http://www.jbc.org/content/early ... M605877200.full.pdf

W3YC

niwanmao 发表于 2018-11-3 11:14
多抗和单抗的设门原则是一样的，只是因为它结合的靶点多而已。
你这样的设置是合理的。如果在用EDTA抑制 ...

倪老师，你是指用EDTA抑制空白管吗？