请教关于流式对照组的设置问题

mifeng

各位，前几天在站里发帖寻求帮助分析流式结果，收获很大，从不懂到要懂，进步了很多。另外感谢倪老师和另一位战友stef1981的热心帮助。
http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=704
这几天看了关于流式设置门对照的资料：设门对照可能是生物对照样本（未刺激样本或无效刺激样本），或使用更为通用的对照，如同型对照或荧光扣除对照（FMO）
现在我整理了下思路，我这个实验，测定：BRDU-FITC和Nestin-Tritc的双标。像荧光扣除对照主要用于多色的流式，染色本底主要来源于荧光泄漏，就不用进行设置啦。
1、应该设置：生物对照样本（即未刺激样本}的FITC单标和Tritc的单标作为门对照，或者只设置其中一个作为门对照就可以了。
2、有没有必要设置同型对照，同型对照是指的什么？同型对照与抗体相匹配又是什么意思呢？

mifeng

还想问一下，设置单标补偿是指设置什么？是不是就是指以FITC单标和Tritc的单标作为门对照？我那个结果的第二张图不就是设置的对照吗？
越来越迷糊啦

stef1981

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对照样本设置
1、空白对照：即不进行任何标记的细胞。主要用于确定待测标本的基础荧光域值
2、同型对照：即用同型抗体作平行实验。同型抗体为没有特异性、与荧光抗体蛋白亚型一致的免疫球蛋白，通常是未进行免疫小鼠血清的纯化IgG1或IgG2。建议选择试剂公司提供的与抗体配套的同型抗体 。
3、二抗对照：间接免疫荧光染色标本，设置以同型抗体作为一抗再加二抗对照管作为阴性对照。
4、补偿对照:多色荧光分析，进行荧光补偿
5、阳性对照：阳性对照即应用已知表达某种抗原的细胞（阳性细胞）进行平行实验。通常用于检测抗体是否有问题或确定实验方法的稳定性、准确性

一套完整的流式细胞术检测样本设置：
1、对于直接标记单色样本，应该设置空白对照、阴性对照（同型抗体对照）和待测样本。对于直接标记多色样本，在单色基础上另加补偿对照
2、对于间接标记单色样本，应该设置空白对照、阴性对照（一抗同型抗体对照）和待测样本。在实际工作中若无一抗的同型抗体对照，可设置不加一抗只加二抗作为阴性对照来代替


   

mifeng

谢谢stef兄的耐心指教，谢谢啦，收获很大