外周血淋巴细胞 细胞周期分开G2期和M期

zc82489319

大家好，我想咨询一下：我的样品是外周血淋巴细胞培养基，将血种于外周血淋巴细胞培养基中培养70h后，用秋水仙素作用2h，然后收细胞。先用了lysis buffer裂红，然后按照下面这篇文献中的方法，用光辉霉素A进行了染色，想看淋巴细胞的细胞周期，尤其是想将G2期和M期分开，想知道样品中M期的细胞量有多少。但是结果根本就没有看到我想要的M期的峰。各位大师们能给个建议么？
Larsen_et_al-1986-Cytometry.pdf (901.77 KB, 下载次数: 23)

2018-11-29 12:17 上传

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niwanmao

文章里面不是把G2和M期分开了吗？见下图的红框

zc82489319

niwanmao 发表于 2018-11-30 09:54
文章里面不是把G2和M期分开了吗？见下图的红框

文章中是分开了，但是我做的没有分开。我做的用的是BD的机器。第一次做的细胞周期图都很丑，当时流式老师选择mithramycin的通道和PI一样的。第二次做的时候呢，参考了一篇新点的文章，但是方法是差不多的，只不过多聚甲醛固定以后，没有用预热到70°C的phosphate buffer稀释，mithramycin的通道选择的是FITC的，细胞周期图是看着还行的，给老师看了，说G2期后面的一点点峰，像是多粘体。我就不清楚到底实验流程中是哪个环节出现了问题？老师对mithramycin这个染料了解么，分析时该如何选择通道？？

zc82489319

niwanmao 发表于 2018-11-30 09:54
文章里面不是把G2和M期分开了吗？见下图的红框

老师，刚刚从你发的帖子里查到了，mithramycin的激发波长是445nm，发射波长是575nm。FITC的激发波长是490nm，发射波长是525nm。那这两个荧光素能用一个设置么？之前老师给我的mithramycin用的就是FITC的通道？

niwanmao

zc82489319 发表于 2018-12-10 20:32
老师，刚刚从你发的帖子里查到了，mithramycin的激发波长是445nm，发射波长是575nm。FITC的激发波长是490 ...

不能的，激发波长相差可大着呢

Jeff

zc82489319 发表于 2018-12-10 20:32
老师，刚刚从你发的帖子里查到了，mithramycin的激发波长是445nm，发射波长是575nm。FITC的激发波长是490 ...

建议你最好还是能精确查好这个荧光的具体激发光谱和发射光谱。（初步来看有可能488和405都可以激发，至于用哪个通道来检测，最好是有具体的发射波长来决定，要不，你就用高配置的仪器，然后不要删掉通道，一个个通道来看，看哪个通道接受效果哦最好）

zc82489319

Jeff 发表于 2018-12-13 15:44
建议你最好还是能精确查好这个荧光的具体激发光谱和发射光谱。（初步来看有可能488和405都可以激发，至于 ...

好的，谢谢老师

zc82489319

niwanmao 发表于 2018-12-12 08:38
不能的，激发波长相差可大着呢

好的，谢谢老师