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[淋巴细胞亚群] 为什么连续三管外周血都没有TH1亚型出现

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发表于 2018-12-8 01:00:36 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 圈儿113 于 2018-12-8 01:05 编辑

是采集的哮喘病人的外周血,用FICOL提取的外周血单个核细胞。不知道为什么感觉有中性粒,提取的时候分层还是明显的。然后,配色方案是。PE/CY7=IL-4,APC CD183,bv421 IL-17a,IFN-γ Percp-CY。我没有染CD3忘记了。试验过程是先刺激,在染去死活,加表面标记,再固定,在清洗染胞内因子。最后加固定液。刺激了5个多小时,用的BD的白细胞刺激COCKTAIL. 连续做了3管 ,TH1/TH2/TH17都很低。但是传统在TH1上表达的CXCR3很高!

QQ截图20181208005126.jpg

CD4

CD4

纵坐标是IL-4

纵坐标是IL-4

CXCR3

CXCR3
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发表于 2018-12-9 22:11:14 | 显示全部楼层
有没有用Brefeldin阻断IFN蛋白转运
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 楼主| 发表于 2018-12-10 10:04:53 | 显示全部楼层
在刺激过程加入的是BD Pharmingen™ Leukocyte Activation Cocktail, with BD GolgiPlug™ 2ul(但是放-80度,每次都要反复冻融,但是说明书又这么说的。。没有添加倪老师您说的这个蛋白阻断剂。我一个月前也是这种做法,有刺激出来。
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 楼主| 发表于 2018-12-10 10:10:32 | 显示全部楼层
之前做了一次刺激剂加错了,本来0.5微升,加了8微升,结果是细胞在清洗的时候丢失了一部分,然后感觉结果更好看?
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发表于 2018-12-10 14:11:57 | 显示全部楼层
圈儿113 发表于 2018-12-10 10:04
在刺激过程加入的是BD Pharmingen™ Leukocyte Activation Cocktail, with BD GolgiPlug™ 2ul(但是放-80度 ...

这个试剂盒已经包含了Brefeldin A。

-80度保存。 用之前,37度水浴快速溶解,1ml细胞培养物中加入2ul cocktail,刺激4~6小时,然后收集、洗涤细胞,开始做表面和胞内染色。

听你这个描述,似乎使用上有点乱。
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发表于 2018-12-17 09:38:27 | 显示全部楼层
圈儿113 发表于 2018-12-10 10:10
之前做了一次刺激剂加错了,本来0.5微升,加了8微升,结果是细胞在清洗的时候丢失了一部分,然后感觉结果更 ...

染胞内细胞因子要做破膜吧?没有使用破膜固定剂吗?
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 楼主| 发表于 2018-12-18 20:12:18 | 显示全部楼层
我想成大牛 发表于 2018-12-17 09:38
染胞内细胞因子要做破膜吧?没有使用破膜固定剂吗?

加了CD4之后,我有加固定破膜,50min后,清洗再加的胞内抗体。
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 楼主| 发表于 2018-12-18 20:27:51 | 显示全部楼层
固定破膜用的BD的破膜固定一起的那个
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发表于 2019-3-10 13:39:27 来自手机 | 显示全部楼层
明显就是刺激剂加少了
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