求问大佬，我染的细胞群为何看不到淋巴细胞？

蒋佳焕

之前做胞外染色，都能明显看到淋巴细胞群，如图1.
现在换到测测胞内：就是先消化成单细胞，四联激活阻断6~12小时，再洗掉，染胞外（同之前染色方案），接着破膜固定，染胞内，最后上机检测。现在几十个数据都看不到淋巴细胞群，如图2.
跪求问大佬，究竟会是出错在什么地方？

niwanmao

固定、破膜之后，FSC和SSC会发生明显改变，所以必须要用淋巴细胞特异性抗体设门。

蒋佳焕

niwanmao 发表于 2019-1-8 09:57
固定、破膜之后，FSC和SSC会发生明显改变，所以必须要用淋巴细胞特异性抗体设门。 ...

谢谢ni老师。我老师说固定破膜虽然会改变，但是不至于没有分群，我固定破膜也做出几例和图1差不多的。

niwanmao

蒋佳焕 发表于 2019-1-8 14:10
谢谢ni老师。我老师说固定破膜虽然会改变，但是不至于没有分群，我固定破膜也做出几例和图1差不多的。 ...

有可能出现的，不是每个样本都一样。有些样本本来就分群不太清，固定破膜之后就会更加不清。

蒋佳焕

niwanmao 发表于 2019-1-8 15:01
有可能出现的，不是每个样本都一样。有些样本本来就分群不太清，固定破膜之后就会更加不清。 ...

谢谢ni老师。那么对于这种样本，是不是每次固定破膜之前都要染CD45，便于之后分群呢？

niwanmao

蒋佳焕 发表于 2019-1-9 14:53
谢谢ni老师。那么对于这种样本，是不是每次固定破膜之前都要染CD45，便于之后分群呢？ ...

推荐染。

marvelwong

niwanmao 发表于 2019-1-8 09:57
固定、破膜之后，FSC和SSC会发生明显改变，所以必须要用淋巴细胞特异性抗体设门。 ...

倪老师，
有很多文献做M2型巨噬细胞的直接就是CD11b+，F4/80+，Ly6G-，CD206+这样子，不用CD45进行标记也是接受的吗？还是说中性粒细胞，巨噬细胞，单核细胞等只需要CD11b+就可以了？谢谢。

niwanmao

marvelwong 发表于 2019-1-11 14:52
倪老师，
有很多文献做M2型巨噬细胞的直接就是CD11b+，F4/80+，Ly6G-，CD206+这样子，不用CD45进行标记也 ...

分群清楚，当然不用也行。但如果分不开，死活染料也没染，此时还不染CD45，数据就完全不可信。

文献也是需要鉴别的，有些文献上的方法都是非流式专业的人做的，甚至有些就是假的