求教关于胞内染色过程中细胞结团的问题

whatsupf

各位老师好！
            我进行的是人外周血细胞制备PBMC后胞内染色
            在胞内染色的过程中，细胞刺激4-6小时后使用FACS洗液洗涤细胞后进行表面染色 刺激后的细胞在培养基中仍是可以吹起的 但在后续表面染色、破膜固定的步骤中基本均有细胞结团的现象 不知问题出在哪里还请赐教
             使用的FACS是自己配的 但FBS开封大于半年 有沉淀 不知是否是这个原因？
              IC fixation solution 以及破膜剂均是thermofisher/eBio的 货号00833356 和00822249
             不知各位老师是否遇到过类似的情况 还请不吝赐教！
              顺便提问各位老师FBS这种有机试剂可否有保存的窍门？ 似乎很容易污染。。。

18832287133

计数了吗？是不是细胞量太大了，如果细胞数量过多，每次离过心之后，下面都会呈现白色细胞团。

niwanmao

每操作一步，都在显微镜下看一下细胞变化，看看究竟是哪一步的操作引起的，从而确定影响原因。