求推荐膜分子表面染色和胞内染色策略

chuan560

想检测淋巴细胞表面膜分子在表面的表达水平和胞内的表达水平，（比如CD4）,一般思维是先染表面CD4（过饱和染），然后固定穿膜，再用其他颜色的CD4染胞内，但是有个问题是，在染完表面固定穿膜以后，再染胞内的时候，表面的CD4是否会二次着色，即使在染表面CD4的时候已经过饱和染了，但是固定穿膜会不会暴露一些CD4的表位，使其在胞内染色的时候再次染上颜色？大家有没有好的方法？实验的目的就是观察一下表面CD4的变化，及胞内CD4的变化。谢谢大家！

niwanmao

貌似不可行。
1、如果采取结合同一表位的抗体，可以这么做，但是这仅限于CD4内吞的情况。
2、如果采取结合不同表型的抗体，即使做了表面CD4的过饱和染色，最后结合的可能也是同一个CD4。
3、我记得CD4是单纯表面抗体吧，最多只在PMA刺激后出现过内吞现象，没有听说表达在胞内的情况。

chuan560

niwanmao 发表于 2019-3-27 14:29
貌似不可行。
1、如果采取结合同一表位的抗体，可以这么做，但是这仅限于CD4内吞的情况。
2、如果采取结合 ...

谢谢倪老师的解答，可能举例子举得不合适， 我是打算检测细胞因子受体，比如IL2Ra(CD25),作为一个膜分子，在表达的过程里面，需要先在胞内表达出来，然后再定位到膜上面，我是想看看这个过程是否出了问题。

niwanmao

chuan560 发表于 2019-3-27 23:49
谢谢倪老师的解答，可能举例子举得不合适， 我是打算检测细胞因子受体，比如IL2Ra(CD25),作为一个膜分子 ...

这样的话，每个样本可以做两管，一管只染表面，一管破膜后染色，这样子，就能区分究竟是否已表达到表面。