流式CV值问题

私学者

问一个比较“傻瓜”的问题，为什么在使用流式之前要保证信号的CV值比较小呢?CV值除了能反应系统稳定性外，还与哪些因素有关呢？如果我的CV值比较大，Drop delay又没有问题，那么能正常分选吗？或设好门以后，能分到我想要的细胞吗？

liuruiluna

首先得看 CV值大是大到什么程度， 流式仪的质控报告有没有pass。 在一定范围内是可以接受的（我以前的记忆中5%以下比较OK）当然，在质控pass的 前提下CV能越小越好。 drop delay体现CV值吗，CV就算很小，drop delay不准，分选的细胞也会shot 得不准？ 如果在低速条件下，CV值都还很大，应该考虑是否有堵喷头或者激光需要去矫正光路。（所以可以先好好清洗，质控仍然不够，可以找工程师检查光路）。   

私学者

liuruiluna 发表于 2019-3-27 17:29
首先得看 CV值大是大到什么程度， 流式仪的质控报告有没有pass。 在一定范围内是可以接受的（我以前的记忆 ...

工程师直接告诉我，CV值越小越好。但没明白的是，只要不是环境引起的CV值变化较大，如果自动计算液滴延迟都通过了，不就能分选了吗，只要圈中想要的细胞就可以了啊。怎么回事？

niwanmao

私学者 发表于 2019-3-27 19:25
工程师直接告诉我，CV值越小越好。但没明白的是，只要不是环境引起的CV值变化较大，如果自动计算液滴延迟 ...

我没做过分选，所以这里仅做一些理论上的讨论，请勿见怪。

从原理上说，Drop Delay反映的是液滴分割是否正确，CV值反映的是信号分布变异度，如果两者均精确，则说明分选的精度高，Drop Delay过关了，液滴分割过关，但如果CV大，说明细胞之间还是存在较大污染的可能性。

私学者

niwanmao 发表于 2019-3-28 13:47
我没做过分选，所以这里仅做一些理论上的讨论，请勿见怪。

从原理上说，Drop Delay反映的是液滴分割是否 ...

是的，CV值大，说明信号采集或样品本身还存在问题，有篇文章介绍说的是：CV值是关于光路元件对齐样品流路的函数，就是说，对得越齐，CV值越小。那么对得不是很齐，只要在图中圈出目标细胞是不是就可以了啊，也就是不必要求CV越小越好呢？

私学者

niwanmao 发表于 2019-3-28 13:47
我没做过分选，所以这里仅做一些理论上的讨论，请勿见怪。

从原理上说，Drop Delay反映的是液滴分割是否 ...

是的，CV值大，说明信号采集或样品本身还存在问题，有篇文章介绍说的是：CV值是关于光路元件对齐样品流路的函数，就是说，对得越齐，CV值越小。那么对得不是很齐，只要在图中圈出目标细胞是不是就可以了啊，也就是不必要求CV越小越好呢？同样只做分析是不是CV也不必要求太高，满足观测要求即可？

liuruiluna

CV和drop delay看的不是一个事儿。你可以理解为，CV值 是看辨识这个细胞是不是你要的细胞的准确度， drop delay看的是机器要shot 细胞的时候，加电荷的时机对不对。两者不是一回事

私学者

liuruiluna 发表于 2019-3-29 22:26
CV和drop delay看的不是一个事儿。你可以理解为，CV值 是看辨识这个细胞是不是你要的细胞的准确度， drop d ...

好的，谢谢