染PI的FSC-SSC图与全染的不一样

mandy · 发表于 2019-3-31 23:14:23

@niwanmao 倪老师您好，我的实验分离了PBMC需要经过培养一天再上机，培养过程中有一些特殊的处理，想看经过这一天培养之后PBMC会不会死了，于是染个PI，染1min就上机，但是发现染PI的那一管的FSC-SSC跟blank，isotype和全染（染了CD3,CD4和IFNγ）的FSC-SSC很不一样，右偏移了。

niwanmao · 发表于 2019-4-1 11:27:13

很难说，如果是从同一孔里面取出来的，这样的差异可能还是归结在染色过程中，破膜处理的影响了。

mandy · 发表于 2019-4-1 20:43:13

niwanmao 发表于 2019-4-1 11:27
很难说，如果是从同一孔里面取出来的，这样的差异可能还是归结在染色过程中，破膜处理的影响了。 ...

细胞时取自同一个孔的，染PI的管没有进行破膜，只是在上机前1min直接染PI。全染的虽然破膜了，但是还有blank那组，blank什么都没染，但是FSC-SSC也是跟全染那个相近，不会像PI那样右移。
那我还能判断“培养过程是否造成细胞死亡”吗？

niwanmao · 发表于 2019-4-2 08:39:10

mandy 发表于 2019-4-1 20:43
细胞时取自同一个孔的，染PI的管没有进行破膜，只是在上机前1min直接染PI。全染的虽然破膜了，但是还有bl ...

可以啊。FSC/SSC的变化，又不能完全代替死活指标，否则我们实验为啥要加死活染料呢，你说是吧

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