关于IL-23R

gdmcwjx2000

请问，有谁用流式分析做过IL-23R的表达，表达率是多少？我测得的数值总是偏差很大。

niwanmao

没做过。可参考一下这篇文章：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_xaykdxxb200901025.aspx
另外能不能上几张图片（FSC-SSC和相应的抗原表达图），大家看看问题所在。

gdmcwjx2000

因为我同时在检测TH17的表达，使用的是三色抗体：CD4 PE-Cy5、IL-23 p40/p70 PE、IL-17A FITC。如果只单纯标记IL-23R，表达在80%-98%之间（这么高，可能吗？）。如果先和CD4标记后继续破膜，破膜后标记IL-17A ，最后测得的结果在10-20%左右。还有一种情况如果先标记CD4，破膜后再同时标记IL-23R和IL-17，表达又在30-40%之间，真是不明啊！？？究竟IL-23R什么时候标记才对呢？破膜前、破膜后还是单独标记，总之三个结果都不一样，差别很大啊，我明天COPY一些图片上来大家分析分析。

niwanmao

因为我同时在检测TH17的表达，使用的是三色抗体：CD4 PE-Cy5、IL-23 p40/p70 PE、IL-17A FITC。如果只单纯 ...
gdmcwjx2000 发表于 2010-11-30 22:33

                               
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IL-23 p40/p70是不是就是IL-12？我看google的结果中基本上都是两个名称写在一起的：http://www.google.com.hk/search? ... ;q=IL-23+p40/p70+PE

gdmcwjx2000

白介 素 23 ( IL - 23 ) 属 IL - 12炎症因子家族成员， 它广泛参 与体 内免疫过程， 调节多种免疫细胞的分化发育、增 殖及炎症反应。IL - 23通过结合细胞膜表面 IL - 23  受体( IL -23R) 复合物， 刺激细胞内信号转导系统来诱 导 细 胞 激 活， IL - 23R 复 合 物 由 IL- 12 RB1和 IL- 23 R两个亚基构成.所以可以有两个标记。

   

gdmcwjx2000

1.下面的是先标记CD4，破膜后再同时标记IL-23R和IL-17A。

wjx-1-陈春华.pdf (85.8 KB, 下载次数: 17)

2010-12-1 21:15 上传

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图1

2.下面的是IL-23R先和CD4一起标记，后继续破膜，再标记IL-17A 。
wjx-1-钟观锦.pdf (86.73 KB, 下载次数: 16)

2010-12-1 21:19 上传

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图2

    wjx-2-邓琼仁.pdf (86.99 KB, 下载次数: 6)

2010-12-1 21:20 上传

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图3

3.单纯标记的就没有保留，删去了。

niwanmao

1.下面的是先标记CD4，破膜后再同时标记IL-23R和IL-17A。


2.下面的是IL-23R先和CD4一起标记，后继续破膜 ...
gdmcwjx2000 发表于 2010-12-1 21:21

                               
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有两个问题：
1、你有没有查过你的抗体结合的位点是IL-23R的胞膜部分还是胞内部分？这关系到IL-23R的检测是否需要破膜。
2、你要检测哪一类细胞的IL-23R的表达？

gdmcwjx2000

1.查过资料，IL-23R是包膜部分的，从我第三种实验方法可以证实：单纯标记不用破膜也得到是结果是80—90%。
2.我测得是CD4细胞的IL-23R表达率。
   

niwanmao

1.查过资料，IL-23R是包膜部分的，从我第三种实验方法可以证实：单纯标记不用破膜也得到是结果是80—90%。
...
gdmcwjx2000 发表于 2010-12-3 00:25

                               
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1、如果确实是胞膜的，那么应该是直接标记，不应该破膜后再标记，破膜会影响胞膜的抗原结合位点。这是应该要有确切的位点结构做证明的，你这种证实方法不能证明它是胞膜的。
2、如果测的CD4+细胞的IL-23R表达率，那么你的IL-23R结果就有问题了，你有没有注意到，IL-23R阳性那群细胞基本上都没有在淋巴细胞区域，并且没有CD4表达。建议你先设一个CD4+的门，然后再分析这个门里面的IL-23R表达试试。