电压对阴性群的影响很大，为什么？

特勒兮兮

这三个图分别是在不同的电压下blank，和样本细胞群的图，有一个问题，为什么样本的阴性群荧光强度会随电压升高而升高，而blank位置，不会变，ISO之前也做过也是一样。

niwanmao

blank还是有变化的，只不过因为你一点抗体都没有加，所以本底低。

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2019-6-5 16:06
blank还是有变化的，只不过因为你一点抗体都没有加，所以本底低。

谢谢倪老师，但其实我关注的是样本的阴性群，既然没有与抗体结合，就应该没有荧光信号，有的只是细胞的本底信号，那为什么荧光信号会随着电压的升高而升高，原理我想不明白。

niwanmao

特勒兮兮 发表于 2019-6-11 09:31
谢谢倪老师，但其实我关注的是样本的阴性群，既然没有与抗体结合，就应该没有荧光信号，有的只是细胞的本 ...

本底信号在机器眼里，跟荧光有差别吗？
就像你在电脑上运行可执行文件和看Word文档，你看上去不一样，但在机器眼里都是0和1

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2019-6-11 11:19
本底信号在机器眼里，跟荧光有差别吗？
就像你在电脑上运行可执行文件和看Word文档，你看上去不一样，但 ...

是的，没有区别，我的点是   ，为什么样本的阴性群荧光信号会随电压的升高而明显升高，但是blank不会，ISO也不会，因为理论上blank、ISO和阴性群未结合抗体，都应该只有本底信号!!!
我纠结于这个问题的原因就是，有些Marker分群极其不清晰，低电压的时候测出来跟ISO没有区别，但是增高电压之后它又会明显往阳性区偏移，但ISO不会，所以这个时候就难鉴定它到底有没有阳性。。。

niwanmao

特勒兮兮 发表于 2019-6-11 13:04
是的，没有区别，我的点是   ，为什么样本的阴性群荧光信号会随电压的升高而明显升高，但是blank不会，IS ...

你还是没理解，blank和iso，上面压根就没结合任何抗体，电压调节之后，变化当然轻微。
至于标记的，你看到的阴性群，上面可不一定完全没结合抗体哦，可能结合了10个抗体分子，可能结合了20个，但没跑出你设置的阴阳性分界。当调节电压到足够大，他们还是可以与真正的阴性拉开一点差距，于是就看到“阴性”群拉宽了。
所以，这就涉及到电压合理性，也是为什么我们一直强调电压要在合理的范围之内。

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2019-6-12 10:25
你还是没理解，blank和iso，上面压根就没结合任何抗体，电压调节之后，变化当然轻微。
至于标记的，你看 ...

您的意思我懂了，但是还是有问题就是，比如第三幅图，这个电压是很大的，如果以blank进行划门，那么blank右边的都是有结合的是不，不管结合多少，那么这个样本的真实阳性率就不是17.91%了，而是更高；

特勒兮兮

niwanmao 发表于 2019-6-12 10:25
你还是没理解，blank和iso，上面压根就没结合任何抗体，电压调节之后，变化当然轻微。
至于标记的，你看 ...

我不钻了，我感觉看了您的解释，我更凌乱了

niwanmao

特勒兮兮 发表于 2019-6-12 11:03
您的意思我懂了，但是还是有问题就是，比如第三幅图，这个电压是很大的，如果以blank进行划门，那么blank ...

设门，本就不应该以blank和isotype设门的呀，这个之前很多帖子里面强调过了（请搜索同型对照关键词）。
正确的设门参照，最理想的是生物学阴性对照，其次是Fc阻断之后的FMO对照。