利用流式细胞术做抗原亲和力

hejinyuan

想请问看看有没有知道怎么利用FCM来检测细胞表面另外表达的抗体与对应抗原的结合力
现在想到的是先利用抗原A-PE 不同浓度 找到染色MFI上限

在另外一组中用抗原A/抗原A-PE的不同比例 再做一次  （这应该在哪个浓度合适？  1/2 的最大MFI ？）

但之后怎么进行计算呢？？

飞翔

你这样好像计算不出来吧，看看这篇文章Cell-Binding Assays for Determining the Affinity of Protein–Protein Interactions:Technologies and Considerations介绍

飞翔

飞翔 发表于 2019-8-8 14:08
你这样好像计算不出来吧，看看这篇文章Cell-Binding Assays for Determining the Affinity of Protein–Pro ...

如果你细胞上抗体是低表达的，可以计算出EC50，特定条件下也可以按这个进行换算，限制条件比较多的

hejinyuan

飞翔 发表于 2019-8-8 14:10
如果你细胞上抗体是低表达的，可以计算出EC50，特定条件下也可以按这个进行换算，限制条件比较多的 ...

您介绍的文献帮助很大
对于里头有张图想请问一下
表二中在做浓度测定的时候 怎么平衡体积在后面就不停增高了呢
我以为是固定体积 浓度一直稀释下去
不知道关于这点您怎么看

飞翔

hejinyuan 发表于 2019-8-9 10:04
您介绍的文献帮助很大
对于里头有张图想请问一下
表二中在做浓度测定的时候 怎么平衡体积在后面就不停增 ...

文献是这么写的，也不太明白它的意义，我在实际稀释过程中都是固定体积进行梯度稀释，这篇文章我主要看了前面介绍的检测原理，后面是实例及这种方法中的影响因素

hejinyuan

飞翔 发表于 2019-8-12 08:35
文献是这么写的，也不太明白它的意义，我在实际稀释过程中都是固定体积进行梯度稀释，这篇文章我主要看了 ...

我做了一次实验 可以得到阳性率随著降低 MFI值也是  做图的时候 用哪个好呢？
文章内写的是ratio 您会建议用MFI 还是阳性细胞比率 或者是一个相乘的总值呢

飞翔

我用的是定量测细胞表面抗原的Beads，通过公式8来计算亲和力的

hejinyuan

飞翔 发表于 2019-8-14 08:01
我用的是定量测细胞表面抗原的Beads，通过公式8来计算亲和力的

怎样的一个定量的bead？
我看文献上说明 我直接在graph-pad里头用non-linear regression 去fit数据

飞翔

hejinyuan 发表于 2019-8-15 14:41
怎样的一个定量的bead？
我看文献上说明 我直接在graph-pad里头用non-linear regression 去fit数据 ...

我用的是bangslabs的Quantum™ FITC-5 MESF的定量Beads，进行计算拟合，graph-pad也有方程可以拟合，没用过，不知道这两种计算方法哪种拟合出的数据更好