关于GFP细胞的细胞周期检测

crisezoe

各位老师：
     我想问下GFP细胞的细胞周期检测，第一次我直接用的是乙醇固定，PI单染，虽然能有细胞周期出来，但是没有GFP阳性细胞。第二次，我按照书上的先加入多聚甲醛，再乙醇固定，还是没有GFP阳性的。同样的细胞做了凋亡是有GFP阳性的。第三次，我用hoechst直接染活细胞，
Add 5 μl 1 mg/ml Hoechst 33342 stock solution and mix again. Incubate 45 min at 37°C.这次出来是一团细胞，没有周期出现，我想问下我的问题出在什么地方？各位老师有没有什么好的方法？用hoechst染色上机时是否和PI调机器一样，做FSC vs SSC,   hoechst W vs hoechst A,     hoechst A 直方图。

niwanmao

不知道你检测是否正确，Hoechst 33342是在紫外光下激光(350 nm)，荧光发射光为蓝色(460 nm)。如果没有紫外光激发的装置，那么你取到的信号就是非特异信号，不是真正的Hoechst 33342信号，所以会是一团分不开的细胞。

crisezoe

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    用的是375的激光

niwanmao

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    用的是375的激光
crisezoe 发表于 2011-1-4 21:23

                               
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不好意思，昨天说错了，这个发射光460nm，是用FL1检测的，而FL1没有A和W的，所以跟PI分析不一样，你分析的时候应该是用FL1的直方图或者FL1-FSC点图分析。