细胞因子检测，都是细胞碎片，无法圈门？求解
步骤如下：
5.1用含10%血清的1640完全培养基将Cell Stimulation Cocktail（500X）稀释成工作浓度（1×），在1.5 ml EP管中使用500μl上述稀释液将PBMC或分离的肿瘤浸润淋巴细胞重悬，转移至24孔板中，37℃培养箱刺激3 h；
5.2取出24孔板吹下细胞，剩下贴壁细胞用胰酶消化后吹下，一并转移至1.5ml EP管中，1500 rpm离心5 min；
5.3 弃上清，加入1 mlFACS buffer重悬细胞，1500 rpm离心5 min，弃上清，加入100μl FACS buffer重悬细胞；
5.4胞外表面染色：加入稀释好的流式抗体避光染色15min；
5.5固定：加入1 ml FACS buffer混匀后1500rpm离心5 min，弃上清，加入100μl 2% PFA 重悬细胞，室温固定30 min；
5.6穿膜并染色：加入1 ml FACS buffer混匀后1500rpm离心5 min，弃上清，加入50 μl含流式抗体的0.1%Triton，室温穿膜染色30 min；
5.7加入1 ml FACS buffer混匀后1500rpm离心5 min，弃上清，加入100μl FACS buffer重悬，流式上机。 | 
发表于 2019-8-21 16:13:56
发表于 2019-8-21 20:04:40
