LPS刺激后分析DC成熟markerCD80、MHCII数据分析圈门

suka

问题：
（1）LPS处理后流式分析血液和脾脏样本中DC标记物CD11c、CD80和MHCII。数据分析时用FSC/SSC圈物理门（单核细胞）发现物理门中细胞数目差异较大，导致后续软件计算平均荧光强度结果不能显示变化趋势，请问应该怎么解决？
（2）在后续的实验中设置流式Protocol时是否应该设定圈门中event一致而不是总体event一样？
（3）像这种分群不是很明显但是整个细胞群的往右移的数据（见图3散点图），用Histogram划分阳性群好还是用散点图圈门？感觉按照空白和单染直接划十字门看起来不是很合理？
不好意思，问题有点多，谢谢大家的回复。

niwanmao

不刺激和刺激之后的FSC/SSC会相差比较大，所以不建议用未刺激做参照设门。
抗体的设门，建议用Fc阻断之后FMO对照设门。

suka

niwanmao 发表于 2019-9-17 19:18
不刺激和刺激之后的FSC/SSC会相差比较大，所以不建议用未刺激做参照设门。
抗体的设门，建议用Fc阻断之后FM ...

嗯嗯，好的。谢谢倪老师~