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[结构和原理] 做流式前计数细胞总数的意义?

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发表于 2019-9-19 05:56:06 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
一直不太懂做流式前为什么要计数细胞的总的绝对数,流式结果最后不都是呈现的一种比例关系吗?并且到收取细胞的时候收取的细胞总量一定不就可以了?
举个例子,假设我要对比两种小鼠(A,B)脾脏中T细胞与B细胞的变化情况,脾脏研磨裂红后,我都取了其四分之一作为样本进行T细胞与B细胞的染色,最终收取十万个细胞进行结果分析,结果显示A种小鼠脾脏T细胞与B细胞比例为1:3(占总细胞数分别为25%,60%),而B种小鼠脾脏细胞T细胞与B细胞的比例为1:1(均占总细胞数的40%)左右,那么我如何知道这种差异是哪群细胞造成的?是B种小鼠的T细胞增多导致的呢还是B细胞减少导致的呢?还是两群均发生了变化?
就算我提前计数使得样本都是一样的细胞数,那流式结果仍然给的是一种比例关系,并且最终收取的细胞数都是一样的,那染色前计数总细胞的绝对数有什么意义呢?(默认流式抗体使用的量是足量的)。

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发表于 2019-9-19 14:10:23 | 显示全部楼层
用组织处理,很难定量。
退而求其次,除非你取固定体积(X cm^3),研磨后统一处理成y ml悬浮液,接着进行计数、获取,最后通过比例计算细胞绝对数。或者处理前不计数,而是获取时加入绝对计数微球,计算细胞绝对数。
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 楼主| 发表于 2019-9-19 16:54:32 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-19 14:10
用组织处理,很难定量。
退而求其次,除非你取固定体积(X cm^3),研磨后统一处理成y ml悬浮液,接着进行 ...

倪老师,能详细介绍一下计数微球的知识吗?或者有没有相关资料,我没查到很详细的原理介绍什么的。  谢谢老师
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发表于 2019-9-19 21:56:10 | 显示全部楼层
immunology 发表于 2019-9-19 16:54
倪老师,能详细介绍一下计数微球的知识吗?或者有没有相关资料,我没查到很详细的原理介绍什么的。  谢谢 ...

以前回答过:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-836-1-1.html
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