肺脏淋巴细胞分离后碎片很多

行棋无悔

各位老师：
       今天分离了肺脏淋巴细胞，效果不太好。主要步骤如下：取肺脏置于平皿上，用PBS洗涤两次后剪碎。然后用消化液37摄氏度振荡消化1h，振荡的频率是200rpm/min，消化液为RPMI1640+10%FCS+200U/ml胶原酶I+80U/ml DNase I。消化结束后发现还有挺大一团肺组织没有消化。将消化液过网筛获得单细胞悬液，然后将单细胞悬液用淋巴细胞分离液密度梯度离心分离淋巴细胞。离心后洗涤细胞两次然后用苔盼蓝染色，显微镜下看到细胞量很少，而且感觉细胞碎片比较多。想问下各位老师，我还需要在哪些方面进行改进。

niwanmao

减少消化时间，可以消化20分钟直接过网筛，或用类似于我们的魔滤这种东西快速磨，效率会比较高。