显微镜下看细胞明显增殖，但是流式检测还是单峰

行棋无悔

各位老师：
      我分离脾脏淋巴细胞用特异性或非特异性抗原刺激5天后，显微镜下看到个别孔的细胞明显增多，成团状，而且收集细胞离心后也明显看到细胞沉淀增多，但是流式检测就是单峰，包括阳性对照，我用PMA+离子霉素刺激，很明显的增殖，但是和阴性的峰图差不多。这是不是和流式检测时调电压有关的，因为我实验室没有流式仪，去其他实验室做的，感觉操作流式仪的人没做过这个实验，不太会调。

niwanmao

CFSE？
从FSC和SSC分布看，貌似细胞活力不行啊

行棋无悔

niwanmao 发表于 2019-10-8 21:02
CFSE？
从FSC和SSC分布看，貌似细胞活力不行啊

老师您好，请问您是怎么看出来细胞活力不行呢？是用0.5uM CFSE染色的，刺激5天，显微镜下看很多团状的细胞，黑色的。

niwanmao

行棋无悔 发表于 2019-10-9 08:08
老师您好，请问您是怎么看出来细胞活力不行呢？是用0.5uM CFSE染色的，刺激5天，显微镜下看很多团状的细 ...

团状，不代表一定是增殖，可能是死了之后粘连的。
黑色不透明的话，往往意味着细胞已经死了。
0.5um按理说应该是可以的，但是可能不同细胞不一样，有没有可能你加的时候没计算正确加多了？

行棋无悔

niwanmao 发表于 2019-10-9 15:04
团状，不代表一定是增殖，可能是死了之后粘连的。
黑色不透明的话，往往意味着细胞已经死了。
0.5um按理 ...

哦，这样。请问老师，你觉得我刺激5天时间会不会太长了。缩到3-4天会不会效果好点呢

niwanmao

行棋无悔 发表于 2019-10-9 15:09
哦，这样。请问老师，你觉得我刺激5天时间会不会太长了。缩到3-4天会不会效果好点呢 ...

一个是浓度要算准，第二个时间做个梯度。5天确实太长了。