破膜后表面标志物丢失

董董

老师您好，我做巨噬细胞胞内iNOS，同时检测膜表面CCR2，发现破膜后CCR2表达会下降，用的APC通道，请问是什么原因。

niwanmao

先做CCR2染色，染色完成后，再进行固定破膜。

董董

niwanmao 发表于 2019-10-27 19:30
先做CCR2染色，染色完成后，再进行固定破膜。

谢谢倪老师，我就是这样做的。

niwanmao

董董 发表于 2019-10-27 23:01
谢谢倪老师，我就是这样做的。

如果分不开，那说明与你的固定剂有配伍禁忌。只能分开一管单做，或者换其它破膜剂。

董董

倪老师，这个也是我（董董）不知道为什么那个号不能发帖了，我还有4个问题：1.做了FMO依然不知道分群在哪里，阴性群主体右侧会有一些弥散的点，可以占到7%。    2.我做的6色，补偿调的还可以，但是两个指标同时看双阳的时候图还是不好看，细胞自发荧光有点高，通道全部用完没有做死活，可不可以一个一个去圈门，SSC-某个指标这样。  3.圈好各个逻辑门之后应用所有数据，发现有的数据位置会变，是不是还是要一个一个手动调整。  4.做的巨噬细胞M1M2，别人都是iNOS+是M1，CD206+是M2，但是这两个指标同时看会有双阳和双阴，M1是否应该是iNOS+CD206-。

董董

C:\Users\DD\Desktop

董董

楼上图片第一排分别未加CD40,F4/80，CCR2，在去粘连后直接SSC和对应通道显示。第二排第1幅未加iNOS,去粘连后直接显示，第二排第2，3图是先圈了CD45后再圈iNOS,右侧的点少了一些。

董董

补充，就是检测iNOS，破膜后CCR2表达会下降，与检测CD40未破膜的CCR2相比。用的赛默飞的破膜剂。

董董

自己再顶一下

niwanmao

董董 发表于 2019-10-31 10:53

之所以没回复，是因为确实看不懂你每幅图对应的是什么样本，你7楼的描述，跟图实在对不起来。