第20次线下聚会PPT：流式在细胞凋亡中的应用

niwanmao

凋亡检测，大家都很熟悉，一听到这词就蹦出Annexin V/PI实验。
但实际上，凋亡检测根据其发生的过程，可分为caspase事件、线粒体事件、细胞膜事件、细胞核事件，这不，在第20次线下聚会上，杭州联科生物的申俊经理，给我们详细地理了一遍这些事件的检测方法，更重要的是，梳理了一些凋亡检测常见的问题并进行了解答，实为做凋亡的FLOWER不可缺少的素材。

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evadj86

太及时了，请教倪老师一个问题，昨天刚做了一例悬浮细胞凋亡的，用PBS洗了两遍，单加AV时，没有AV阳性细胞出现，不知道为什么？单加PI时，有PI阳性细胞。

niwanmao

evadj86 发表于 2019-11-20 14:16
太及时了，请教倪老师一个问题，昨天刚做了一例悬浮细胞凋亡的，用PBS洗了两遍，单加AV时，没有AV阳性细胞 ...

就是象上面PPT中所说的，洗涤和染色，都应该用含钙离子的专门缓冲液。

RIBB

老师你好，想请教你关于凋亡结果四象限的问题，左下是活细胞是没有争议的。
我看有的说左上是坏死细胞，右上是晚凋 右下是早凋，统计时统计右上和右下比例之和作为凋亡率。
还有一种说是右上是坏死细胞，右下是凋亡细胞，统计只统计右下凋亡细胞的比例作为凋亡率。
想请老师解答下这个疑惑，谢谢.

niwanmao

RIBB 发表于 2020-4-25 11:55
老师你好，想请教你关于凋亡结果四象限的问题，左下是活细胞是没有争议的。
我看有的说左上是坏死细胞，右 ...

右上象限严格来说，不能算凋亡了。最好是只统计AV+PI-的部分。

范晋波

evadj86 发表于 2019-11-20 14:16
太及时了，请教倪老师一个问题，昨天刚做了一例悬浮细胞凋亡的，用PBS洗了两遍，单加AV时，没有AV阳性细胞 ...

你用含有Ca2+ 的缓冲液才行，因为Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，才能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（PS）高亲和力特异性结合。

yxyyjs

学习
顺便说下，刚试用了联科新推出的针对BD公司C6这个小型流式细胞仪凋亡试剂盒，样本制备、染色、补偿调节和结果分析上来看，发现和他们一直在买的通用型的凋亡试剂盒在结果上完全没有差别呀