关于脑组织的流式分析的样本制备

切肉小生

如题
目前想尝试做一下脑组织裂解成单细胞悬液后进行流式分析和分选，尝试了两次后发现细胞死亡率很高，按照文献里percoll去髓鞘和碎片后细胞所剩无几，因此想来论坛请教一下相关经验的大神还有倪老师，在此谢过！@niwanmao

niwanmao

你的具体做法？

一般还是只能通过使用温和的酶，并控制消化时间来优化。

切肉小生

niwanmao 发表于 2019-11-21 21:06
你的具体做法？

一般还是只能通过使用温和的酶，并控制消化时间来优化。 ...

老师好我是先研磨过70um的筛子然后用的是liberase TL酶 0.8 Wünsch /ml 37度 1小时消化再过一遍70um的筛子

liuruiluna

需要根据样本情况摸条件。所谓摸条件，无非是调整消化的时间，和消化酶的使用。1小时造成了细胞大量死亡，那就摸几个时间点 比如 40分钟  50分钟  ，看情况怎么样。如果还是不行，还有一些口碑比较好的温和解离试剂可以试试有没有区别

niwanmao

切肉小生 发表于 2019-11-22 15:37
老师好我是先研磨过70um的筛子然后用的是liberase TL酶 0.8 Wünsch /ml 37度 1小时消化再过一遍70um的 ...

你可以参考这本册子，换一种酶操作：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5834-1-1.html

另外，建议还是消化后统一过滤。

切肉小生

niwanmao 发表于 2019-11-23 11:04
你可以参考这本册子，换一种酶操作：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5834-1-1.html

另外，建议还是 ...

好的谢谢老师！

切肉小生

liuruiluna 发表于 2019-11-22 16:20
需要根据样本情况摸条件。所谓摸条件，无非是调整消化的时间，和消化酶的使用。1小时造成了细胞大量死亡， ...

多谢仁兄