小鼠肺组织内皮细胞分选

lilychen723 · 发表于 2019-12-5 14:47:57

我有个问题想请教大家，我想分离小鼠肺组织的内皮细胞，我用的是Biotin-CD31,先和小鼠肺组织细胞共同孵育，然后加入磁珠，最后用磁极吸附。在标完FITC-CD31抗体后检测分离效率，发现只能达到百分之50左右，请问有可能是哪里有问题呢？我看到文献里是这样做的，先用带荧光的CD31敷育细胞，然后加入IgG磁珠，然后流式检 QD57NGWNAD@}`N{G0$]28RN.png

测这个荧光，效率能达到百分之九十多，我觉得这样做不太对啊。

niwanmao · 发表于 2019-12-5 21:37:20

用带荧光素的抗体孵育然后再磁珠分，确实是第一次看到。但如果荧光素不影响磁珠与其结合，是可以的。

liuruiluna · 发表于 2019-12-6 14:55:03

文献用的是抓取FITC荧光素标记抗体的磁珠分选试剂盒，你用的是抓取biotin标记抗体的磁珠分选试剂盒，所以他不用分选后再标记荧光素。你这种要再标记荧光素一次，麻烦一些，变数也多一些，你也可以换这种直接抓取FITC的磁珠分选试剂盒。对于磁珠的正选来说，想增加纯度，需要增加过磁场的次数，但回收率会相应降低，属于正常现象

lilychen723 · 发表于 2019-12-8 18:30:01

niwanmao 发表于 2019-12-5 21:37
用带荧光素的抗体孵育然后再磁珠分，确实是第一次看到。但如果荧光素不影响磁珠与其结合，是可以的。 ...

好的，谢谢老师。

lilychen723 · 发表于 2019-12-8 18:34:32

liuruiluna 发表于 2019-12-6 14:55
文献用的是抓取FITC荧光素标记抗体的磁珠分选试剂盒，你用的是抓取biotin标记抗体的磁珠分选试剂盒，所以他 ...

好的，谢谢老师，可是如果后期我不需要每次都检测纯度了，就不需要带荧光标记的CD31了，要怎么做呢？

lilychen723 · 发表于 2019-12-8 18:35:22

谢谢老师们的回复，可是如果后期我不需要每次都检测纯度了，就不需要带荧光标记的CD31了，要怎么做呢？

lilychen723 · 发表于 2019-12-8 18:35:42

liuruiluna 发表于 2019-12-6 14:55
文献用的是抓取FITC荧光素标记抗体的磁珠分选试剂盒，你用的是抓取biotin标记抗体的磁珠分选试剂盒，所以他 ...

好的，谢谢老师，可是如果后期我不需要每次都检测纯度了，就不需要带荧光标记的CD31了，要怎么做呢？

liuruiluna · 发表于 2019-12-9 09:45:53

那就不管它呀，分选完了想做什么做什么（如果你做的不是与荧光检测相关的实验），不上机检测纯度就行了

niwanmao · 发表于 2020-1-10 19:24:21

lilychen723 发表于 2019-12-8 18:34
好的，谢谢老师，可是如果后期我不需要每次都检测纯度了，就不需要带荧光标记的CD31了，要怎么做呢？ ...

一般后续培养几天，抗体应该就会掉下来了。

598876782@qq.co · 发表于 2020-3-4 17:03:56

你这第一次加的CD31抗体来纯化，然后加CD31-FITC来标记。先标记的Biotin-CD31肯定把部分细胞上的CD31位点全都封闭了啊，再用CD31-FITC不就标不上，显示成阴性了？

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[磁珠分选] 小鼠肺组织内皮细胞分选

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