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[淋巴细胞相关] 分析流式数据,关于表达某种蛋白的细胞百分比及MFI的数....

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发表于 2019-12-14 20:48:36 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星未解决
各位老师好,最近在分析流式数据中,遇到了一些问题,阐述如下:我的实验目的是:比较不同慢性病毒感染患者外周血T细胞表面某种蛋白(如:抑制性分子PD-1)的表达量。我采用使用PD-1阳性的T细胞百分率比较,发现各实验组之间无差别。  查询文献发现,也有使用MFI来比较蛋白的表达量。针对正态分布的图像,采用mean值;非正态分布图形,采用median值?   我的问题是:1.分析我的流式数据发现,针对CD4 T细胞而言,这种蛋白阳性的表达量的图像仅仅是右移,并没有明显分群;但CD8 T细胞而言,出现了明显的细胞分群。那么我应该,使用阳性细胞百分比来分析数据,还是使用MFI 呢?   2.如果使用MFI来分析数据,我应该使用哪种参数呢?mean?median?    3.比较MFI值时,到底是用实验组的MFI减去同型对照组的MFI;还是相除呢?   流式数据图展示如下:

1576327622(1).png
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发表于 2019-12-15 13:00:47 | 显示全部楼层
不要用Isotype,用Fc阻断+FMO对照设门。
分析比例。从你这里的CD8+T还是可以看出分群的
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 楼主| 发表于 2019-12-15 14:10:22 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-12-15 13:00
不要用Isotype,用Fc阻断+FMO对照设门。
分析比例。从你这里的CD8+T还是可以看出分群的 ...

倪老师,您好!我的染色panel如下:对照组:CD3+CD4+CD8+CD25 iso+CD127 iso+PD-1 iso;  实验组:CD3+CD4+CD8+CD25+CD127+PD-1抗体。  这样可以同时分析Treg和CD4 CD8T细胞表面PD-1的表达量.省样本量,也省抗体。  必须严格使用FMO对照吗?
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发表于 2019-12-15 16:41:21 | 显示全部楼层
Janexuan 发表于 2019-12-15 14:10
倪老师,您好!我的染色panel如下:对照组:CD3+CD4+CD8+CD25 iso+CD127 iso+PD-1 iso;  实验组:CD3+CD4 ...

Treg结合CD25和CD127散点图很容易区分,可以不用做对照。
只需做好Fc阻断之后,做一管PD-1的FMO对照是最关键的。
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 楼主| 发表于 2019-12-15 18:52:52 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-12-15 16:41
Treg结合CD25和CD127散点图很容易区分,可以不用做对照。
只需做好Fc阻断之后,做一管PD-1的FMO对照是最 ...

好的  谢谢倪老师解惑
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