流式抗体配色问题

小哈happy哈

各位老师好～我最近用流式测肿瘤组织里的T淋巴细胞，做两组实验，分别标APC-CD3，PE-CD4，FITC-CD8，另一组是PE-CD4，FITC-CD8，Per-CP-Cy5.5-CD44和APC-CD122，用7-AAD染死活，结果发现测的时候FITC太弱了，CD8阳性很低，PE太强，CD4的阳性很高，导致结果没法用，这个实验很着急，现在只能重新搭色，想请教各位老师在最少改动的情况下我可以把哪几个抗体的颜色换一下，染死活的也想换一个，不知道有啥好推荐没，非常感谢各位老师的帮助！！！
我用的流式是一台五激光（355，405，488，561，640的）19色的，再次感谢！！！

112358answer

一般弱表达的抗原搭配强荧光，高表达的抗原搭配弱荧光，我觉得CD3，CD4都用了很强的荧光素不太有利于你之后的进一步研究（比如需要检测细胞因子之类的）。

至于实验问题，PE太强，FITC太弱，可能和你染色时候的浓度以及上机时候的电压有关系，你可以通过抗体滴定来找到最适合的抗体浓度和电压，理论上应该挺好看出分群的，所以没有必要换。当然换到其他一个补偿较小的通道也不错。
活死染料的话，405通道的Zombie染料都挺好用的（Biolengd），可以试试，在你的实验里也不怎么需要调补偿。

另外，你第二组实验没有CD3，如果是要分析T细胞，可能不太好哦，可以考虑把两组的CD3换成通用的荧光（APC/Cy7之类的）。

最后最后，实名羡慕下五激光19色的仪器，哈哈哈