人外周血磁珠分选CD14细胞，培养5天后形成idc，流式图求助

keyufeng

各位老师好，我做人外周血来源DC的CD80表面标记物鉴定，在blank组中，P1圈的就是树突状细胞，90％说明我养的细胞里，树突状细胞的纯度是很高的。但是我加入抗体之后，不管是HLA-DR，还是CD80，亦或是其他，P1圈的树突状细胞的比例只有70％左右，有时候只有50％，所以我想问问是什么原因造成的。blank组

blank组

CD80单染组

CD80单染组

niwanmao

keyufeng 发表于 2019-12-25 16:06
这两组的细胞是同一批次的，离心次数，孵育时间都一模一样，而且我也试过不用磁珠，直接贴壁法培养DC，5 ...

这些信号肯定与非特异性信号无关的，非特异性信号出现在荧光通道，而且是增强的。目前这片门外的信号都是碎片。

keyufeng

同样的处理条件，同样的操作人员

niwanmao

blank组和CD80单染组，样本是同一个？

keyufeng

niwanmao 发表于 2019-12-25 14:19
blank组和CD80单染组，样本是同一个？

是同一个，倪老师

niwanmao

keyufeng 发表于 2019-12-25 14:28
是同一个，倪老师

因为缺少太多细节，无法准确说出来原因。
从图上看，单标管这些多出信号都是碎片。

keyufeng

niwanmao 发表于 2019-12-25 15:23
因为缺少太多细节，无法准确说出来原因。
从图上看，单标管这些多出信号都是碎片。 ...

这两组的细胞是同一批次的，离心次数，孵育时间都一模一样，而且我也试过不用磁珠，直接贴壁法培养DC，5天后染抗体也是这种效果，说明不是磁珠的问题。
我现在考虑两种情况：
1.会不会是抗体的原因，抗体厂家是biolegend
2.我没有用FC受体阻断剂，会不会是非特异性染色太强？

keyufeng

niwanmao 发表于 2019-12-25 16:12
这些信号肯定与非特异性信号无关的，非特异性信号出现在荧光通道，而且是增强的。目前这片门外的信号都是 ...

好的，非常感谢倪老师的答复，我会往造成碎片原因这一方面再考虑考虑。