流式结果FSC信号为负值，还能换算细胞大小吗

xiaoyao177147

      我通过流式分析海水里面藻类的大小和数量，主要分析的藻的类群有P1、P2、P3三个类群。由于是现场藻类，并不像实验室藻类那样各种参数比较均一；此外海水样本的直径范围较大，导致流式的检测范围无法完全涵盖而出现负值。(https://mp.weixin.qq.com/s/jb2DhV6TjHRx8GySlZ5wbA)倪老师在此帖中谈到的双指数数据处理方式，而我的数据也是采用该显示模式，会看到负值的存在。

      按照mie theory，FSC与细胞大小成指数方程，方程我已经拟合好了。但是我存在一个疑问，负值的FSC是不符合这个方程的，所以我想知道数据是不是需要进行某种转换。咨询很多人，都没有解决。希望@niwanmao 可以指点我一下，非常感谢。

      (数据是FSC，所以不应该存在补偿的问题。实际上我也没做任何补偿。)

niwanmao

FSC和细胞大小的正相关，只在一定范围内有效，如果要精确测量，还是建议用专门的粒度仪比较好。
如果只是估计的话，为避免负值，那么尽量用较高的电压，避免负值出现吧。

xiaoyao177147

https://flowjo.typepad.com/the_d ... egative_fluore.html
谷歌找到一个相关帖子，有点专业不是太看得懂
初步有个理解：对于每一个荧光和基线都有测量的误差SD, 当一个偏低误差的荧光值减去一个偏高误差的基线时，就容易出现负值，但从总的分布来看，其mean应该是不变的。

xiaoyao177147

niwanmao 发表于 2020-4-11 14:37
FSC和细胞大小的正相关，只在一定范围内有效，如果要精确测量，还是建议用专门的粒度仪比较好。
如果只是估 ...

谢谢倪老师的建议。我还想问一下，既然这些值都是换算得到的。那么，能否将低电压的荧光值按照公式推算得到高电压值下的荧光值呢？

niwanmao

xiaoyao177147 发表于 2020-4-11 19:37
谢谢倪老师的建议。我还想问一下，既然这些值都是换算得到的。那么，能否将低电压的荧光值按照公式推算得 ...

粗测可以，精测做不到的。