BD红裂液和PMA刺激匹配吗？

sugarswallow · 发表于 2011-3-23 19:54:14

尝试直接用全血（不用分离PBMC）检测IL-17的频率。用PMA+离子霉素和gorg-stop阻断剂，培养5h，当加完表面标志后，用BD红裂液裂解红细胞，裂解后离心，发现细胞已经凝集成片状了，类似于像一个“皮屑”，加入PBS后重选，沉淀怎么也不能吹散？不知道坛子里的朋友们碰到这码子事没有，BD红裂液是work的，上午才用它裂解了未经刺激的全血，效果很好！是不是就不能用全血法检测IL-17或者其他胞内因子？请帮我出出招？

llhlz1971 · 发表于 2011-3-23 20:34:15

最好先提取淋巴细胞后,再做此实验,似乎破膜固定剂影响红裂解液的效果.

niwanmao · 发表于 2011-3-23 21:27:31

全血法检测细胞因子肯定是可行的，这个你不需要怀疑，见：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=216
关于加裂解液之后成絮状的问题，我以前偶尔碰到过几次，应该总体来说很少见，基本上是一些淋巴瘤或者骨髓瘤病人，过滤之后，结果就不理想了。我估计是跟标本血浆中的免疫球蛋白物质有关吧。
至于处理步骤，我建议还是按照细胞因子染色步骤来吧，不要用裂解液，因为试剂盒的permeabilization buffer里面已经包含了裂解红细胞的成分。

chujindong · 发表于 2011-3-23 21:34:10

这个我还没做，但是我提PBMC后若是有红细胞，会用裂解液，裂解后细胞就是你所描述的那样，片状、吹不散。据其他人分析，这样的细胞可能是死了。
我觉得是红细胞裂解液使用方法不当，因为我就是使用方法不当出现这种情况的。我见过师姐使用红细胞裂解液不按说明做，加的量少了，结果红细胞裂解不全，白细胞出不来。
建议你严格按说明做一做，不要怕浪费裂解液。

sugarswallow · 发表于 2011-3-24 18:16:55

我倒觉得估计跟PMA活化后对红细胞膜的影响有关。有说法是PMA使红细胞的膜更有韧性，使用方法的话，觉得应该没有多大差别，跟没有活化的全血是一样的做法？没有活化的全血都没有问题。裂解得很好！确实比国产的红裂液好？但是PMA活化或者离子霉素或者阻断剂得有影响？

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