C57小鼠组织检测Th17/Treg

杨山南

流式初学者分选C57小鼠组织中的Th17/Treg，目的是看组织中最原始的Th17/Treg分布情况
Treg 的选的maker是CD4+CD25+Foxp3+ ；Th17的maker是：CD4+RORgt+IL-17
实验过程是制成单细胞悬液后用invitrogen的刺激试剂（eBioscience™ Cell Stimulation Cocktail plus protein transport inhibitors) 37度刺激5小时，然后染表染maker：CD45，CD3, CD8, CD25,  然后破核染foxp3, RoRgdt和IL—17。
问题是：刺激之后T细胞会有增殖和分化，各表型的T细胞占比肯定会有变化，这样染出的treg和Th17的占比情况还能代表原来的组织中它们情况吗？可是不刺激怎么染IL—17呢鉴定Th17呢
求指点

niwanmao

杨山南 发表于 2020-4-26 07:41
谢谢老师！我这两天看到有资料说在PMA的刺激下, CD4表达迅速下调, 此时采用CD4来标记Th细胞已经不能准确的 ...

只要CD4能分群，比例就是准确的。

niwanmao

可以代表，因为刺激后能分泌IL-17的才说明这些细胞是Th17，本身就存在的。

杨山南

谢谢老师！我这两天看到有资料说在PMA的刺激下, CD4表达迅速下调, 此时采用CD4来标记Th细胞已经不能准确的检测Th细胞，可是我刺激后检测的Th17/Treg却是从CD4门里圈出来的，CD4都改变了，不是组织最原始的情况了，后面这些还有圈门还有意义吗？