小鼠 肿瘤浸润淋巴细胞 TIL 的检测

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如图，图1是小鼠 脾脏 裂红后的图，圈出了我认为的淋巴细胞群（图1，红色门）

图1

，在电压相同的情况下，我将该门直接复制到小鼠 肿瘤组织裂红后的单细胞悬液里（图2，红色门）

图2

，图3-图7分别是单染管

图3

图4

图5

图6

图7

请问 各位大神们
1.我在相同电压下，将小鼠脾脏淋巴细胞群的门套用在小鼠肿瘤细胞群的作法 是否可行？
2.图2里的黑色门（P13）是碎片和死细胞么，那我是否只圈绿色门（P12）就可以？绿色门右上方是否就是肿瘤细胞群了~？
3.我的裂红方法是 将细胞沉淀以 0.2%Nacl 3ml 重悬20s，后以1.6%Nacl 3ml 中和，这个方法是否合适？（是否会对肿瘤或者其余细胞有影响？）

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我的小鼠肿瘤是以胶原蛋白酶，37℃水浴，40分钟摇晃裂解，过滤后，裂红，染色。图3-图7分别为 死活（7-AAD），CD45,CD3,CD4,CD8单染管，哦，再上个阴性管