小鼠肿瘤浸润淋巴细胞分型

shux

流式新手，第一次做小鼠皮下肿瘤浸润淋巴细胞，平台的老师不在，自己试着做了一下，参数可能设置的有问题，收回来的数据感觉有点奇怪，哪位老师能帮忙看一下，谢谢！
染色方案：BV510-L/D; APC/Cy7-CD45; FITC-CD3; PE-CD4; APC-CD8
应该圈哪一群细胞进行免疫细胞分析呢？

niwanmao

是坐标的问题，因为你用的CytoFLEX坐标范围大，所以需要在分析软件上进行坐标范围的调整才行，并且要设置为LIN才行。至于后面的荧光标记，因为不知道你究竟做了哪些抗体，所以你按照下图这样圈出淋巴细胞后，自行分析即可。

RIVA

从图上看：1、FSC的电压设置的不对，太大了

2、肿瘤浸润的淋巴细胞从FSC/SSC上看不到，需要调整取材位置或者流式上机的时候多收点细胞
3、第二张图看，CD45阳性的细胞很少，再次证实，第二条

Sylvia53

RIVA 发表于 2020-9-9 09:28
从图上看：1、FSC的电压设置的不对，太大了

2、肿瘤浸润的淋巴细胞从FSC/SSC上看不到，需要调整取材位置或 ...

请问一般做TIL的时候收集多少细胞量合适呢？

niwanmao

Sylvia53 发表于 2023-2-21 18:29
请问一般做TIL的时候收集多少细胞量合适呢？

如另一个帖子所述，按总数获取，很难确定最后目标细胞有多少，所以应该圈中目标细胞，然后设置目标细胞门内事件数达到多少个才停止。TIL的话，就是设置CD45+LIN-门内的事件数。