细胞凋亡分析FITC-Annexin V/PI双染检测细胞

Rodriguez

刚开始做实验，使用的是FITC-Annexin V/PI双染，检测凋亡。不同浓度药物结果如下图
问题：
（1）相比淋巴亚群检测，这个项目FITC和PI通道的电压都调的比较低，请问这是正常的吗；
（2）荧光补偿设置也比较高，FITC溢出到PI的荧光补偿调到70%才能到这种效果，而我用荧光补偿微球测试的FITC溢出PI通道应该没有这么高的。
有做过细胞凋亡的麻烦看下，或者能不能提供下参考图，感谢

niwanmao

1、电压比淋巴亚群低很多是可以的，因为检测指标不同。
2、补偿和补偿微球不同，这也完全正常，补偿微球本来就是一个大致了解补偿的东西。

xiaogang1

最后结果还可以呀，补偿高我也遇到过，最初也是70，后来我调低PI电压，调高FITC电压，最后补偿9就可以了，你可以试试！

Rodriguez

niwanmao 发表于 2020-11-16 15:36
1、电压比淋巴亚群低很多是可以的，因为检测指标不同。
2、补偿和补偿微球不同，这也完全正常，补偿微球本 ...

谢谢倪老师的回答！
如果补偿微球只能做参考，请问有什么好的调补偿的方式？
细胞凋亡的补偿一般需要先单染调补偿吗？
还是严格来说使用单染，直接用双染调补偿也可以。
麻烦了

Rodriguez

xiaogang1 发表于 2020-11-17 09:08
最后结果还可以呀，补偿高我也遇到过，最初也是70，后来我调低PI电压，调高FITC电压，最后补偿9就可以了， ...

我试了一下，改变FITC电压，补偿确实可以调小到20！非常感谢！