做细胞周期的固定问题

ljw2020

请教各位，最近做的一种海藻的细胞周期测定，这个藻没有细胞壁，细胞固定方法如下：取一定量的藻液离心收集藻细胞，然后PBS洗涤，然后重悬藻细胞成藻液，将藻液逐滴加入到冷乙醇中，放到-20℃冰箱中保存，隔天上仪器测。
问题如下:感觉这个乙醇固定细胞之前的处理时间是不是太长（大概需要1.5小时），我是想看每个取样时间的变化（就是每隔几个小时它细胞周期的变化），所以我想请教一下有没有比较快的固定方法，谢谢。

niwanmao

固定前的操作为什么需要1.5小时？是否能缩短？
你这里应该重点是固定前的离心操作才对。固定至少需要24~48小时才能生效。

ljw2020

niwanmao 发表于 2020-11-18 20:17
固定前的操作为什么需要1.5小时？是否能缩短？
你这里应该重点是固定前的离心操作才对。固定至少需要24~48 ...

嗯 是的老师， 固定前 我要离心然后去上清然后收集细胞，在用PBS洗一下，转移到小的离心管里，再离心去掉PBS ，然后再剩余一点PBS涡旋成悬液加到冷乙醇中，到加到乙醇之前的这一步操作时间大概就得一小时，因为每次要处理九个样品，所以时间可能缩短不了了。
所以我在想有没有方法，在取样时，离心之前就把它给固定了。

ljw2020

niwanmao 发表于 2020-11-18 20:17
固定前的操作为什么需要1.5小时？是否能缩短？
你这里应该重点是固定前的离心操作才对。固定至少需要24~48 ...

我问了一个老师，他建议我用多聚甲醛固定，就在取样时直接加到藻液，这样就达到及时固定的目的了。不知道这种方法是不是可行

niwanmao

ljw2020 发表于 2020-11-19 10:50
我问了一个老师，他建议我用多聚甲醛固定，就在取样时直接加到藻液，这样就达到及时固定的目的了。不知道 ...

藻类我不知道步骤上是否有区别，但至少在我们做动物样本的时候，不建议用多聚甲醛的，因为多聚甲醛主要固定的是蛋白，核酸反而容易漏出去。