CD196和CD183可以代替IL-17A和IFN-gamma检测Th1/Th17吗？

cellprobe

问题一：通常，使用CD4 + IFN-gamma + IL-17A检测Th1和Th17的比例；
但是刺激细胞，固定和破膜比较麻烦，而且细胞损失很多。
目前一些文献里面可以用CD4 + CD196 + CD183检测Th1和Th17的比例，
这样在实验操作上就很方便了。但是我看到中检院的一些PPT上没有用CD196和CD183，
请问大家有用CD196和CD183的经验吗？这个组合可靠吗？
多谢！

问题二：目前，我手上只有CD4，IFN-gamma和IL-17A的抗体，所以这周还是要刺激，固定，破膜。
请问PBMC在刺激5-6个小时以后，CD4染色，多聚甲醛固定以后，避光保存在DPBS（2-8度），第二天再破膜和细胞内因子染色。这样做可以吗？
多谢！

niwanmao

1、临床上一直都是用CD183和CD196区分的，就是Nature上当年那篇人类免疫学计划提倡的：八色方案区分各类免疫细胞亚群
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3290-1-1.html
(出处: 流式中文网)


2、一般尽量当天做完，你早上8点上班，刺激5~6小时，也就下午2点不到，染个色，不是刚刚好？

cellprobe

niwanmao 发表于 2020-12-15 08:25
1、临床上一直都是用CD183和CD196区分的，就是Nature上当年那篇人类免疫学计划提倡的：八色方案区分各类免 ...

1. 临床上一直是用CD196和CD183区分Th1/Th17，为什么科研上主流还是IFN-gamma + IL-17A？
2. 有时候一天工作太多，如果刺激，CD4染色后，固定，2-8度保存过夜，有哪些弊端？
谢谢！

niwanmao

cellprobe 发表于 2020-12-15 08:31
1. 临床上一直是用CD196和CD183区分Th1/Th17，为什么科研上主流还是IFN-gamma + IL-17A？
2. 有时候一天 ...

1、临床上更注重稳定性。表面标记更好操作，批间差小。 而科研标本，更注重对细胞性质的证实，用胞内因子证实，更容易说服评审。
2、如果真要保存过夜，建议做好比对吧。不是说绝对不行，但至于要确认这个方法无显著影响。

cellprobe

niwanmao 发表于 2020-12-15 11:13
1、临床上更注重稳定性。表面标记更好操作，批间差小。 而科研标本，更注重对细胞性质的证实，用胞内因子 ...

如果是检测干细胞药物对PBMC的调控能力，可以用CD196和CD183吗？算是干细胞药物的质量研究。

niwanmao

cellprobe 发表于 2020-12-15 12:14
如果是检测干细胞药物对PBMC的调控能力，可以用CD196和CD183吗？算是干细胞药物的质量研究。 ...

前面的意思很明确了，看你们自己的需求。