血小板激活实验

yinxl2020

各位老师好，小弟最近在做血小板激活实验，因为第一次做，遇到了不少问题，我们选的抗体是：cd41a-FITC, cd61-FITC, CD63-PE, CD62p-APC.因为是第一次做，我们只做了阴性对照和ADP激活的阳性对照：
1 关于画门的问题，我们做出来的图是图123这样的，我看和有些文献的不一样，不知道是不是这样画门的，还是我们参数选错了。

图1

图3

图2

                   图1                                                                 图2                                                               图3
2 有关血小板比例的问题：我们画出的门血小板比例只有10%左右，有些只有5%左右。

图4

   

图5

                              图4                                                            图5
3 有关激活的问题：文献上说如果操作不小心，背景激活都能到50%，可是我们用了ADP去激活，血小板激活比例也只有5%左右。
我们现在严重怀疑自己哪里做错了，可是所有步骤又是按步骤一步一步来的，所以也不知道哪里出错了.... 想请教各位老师，这里哪里出了问题。

niwanmao

CD41/CD61的散点图呢？

yinxl2020

niwanmao 发表于 2021-1-13 12:37
CD41/CD61的散点图呢？

老师，我们没有用ssc和FITC筛血小板的细胞。就用了图1的ssc/fsc然后圈的血小板那群，图2就是第二个门，然后是图3的pe和apc的阳性图。抗体是：CD41a-FITC，CD61-FITC， CD63-PE, CD62p-APC。FITC我们买的invitrogen的，他们没有CD41a/CD61-FITC，所以买了CD41a-FITC，CD61-FITC两个抗体，一起加的。

niwanmao

yinxl2020 发表于 2021-1-13 17:55
老师，我们没有用ssc和FITC筛血小板的细胞。就用了图1的ssc/fsc然后圈的血小板那群，图2就是第二个门，然 ...

我在怀疑的是R1门是否圈的对？所以需要通过CD41/CD61高表达来明确血小板群体。我看你的R1门内，CD41/CD61阳性只有很少，所以我怀疑是粘附了血小板的小的红细胞

yinxl2020

niwanmao 发表于 2021-1-14 07:49
我在怀疑的是R1门是否圈的对？所以需要通过CD41/CD61高表达来明确血小板群体。我看你的R1门内，CD41/CD61 ...

老师，我们在做的时候也把全部细胞都全进来过，就是图1呈现的三块细胞群，我们都圈了。后面的FITC结果还不如这样圈的。老师我们准备再做一遍。看看是不是操作哪里出了问题。我想问下您，这次我们做的时候是不是要再多画一个门，横纵坐标设成ssc/FITC，这样看看纯阳的细胞？然后我把我们做的步骤上传了，您能帮忙看下吗？我们只是做的预实验，所以只有阴性组和阳性组。麻烦您了
我看您之前发的帖子，全血我们是从第三管开始做的血小板激活实验。