人外周血Treg细分亚群的设门分析和正常范围

niwanmao

设门

(A-C)淋巴细胞按大小和颗粒度设门，排除粘连体，圈活的CD4+T细胞。
(D)调节性T细胞(Treg)鉴定为CD4+CD25HighCD127 low(红门)，其余细胞鉴定为“非Treg”T细胞(蓝门)。
(E&F)细胞经固定和特殊破膜后，进行FOXP3染色。
在(E)中，虚线表示CD25阴性、弱和高表达的定义。
在(F)中，相对于Treg FOXP3 FMO对照(纯灰色)，显示了CD4+ CD25High CD127lowTregs(红线)和非Tregs(蓝线)中的FOXP3表达，图示中显示了平均荧光强度(MFI)值。
(G和H)Memory Tregs和Memory Non-Tregs表型均为CD45RA-CD45RO+。
根据CXCR3、CCR4和CCR6的表达，(I-N)Treg和Non Treg Th亚群定义如下：Th17(CXCR3-CCR4+CCR6+)、Th1(CXCR3+CCR4-CCR6-)、Th17.1(CXCR3+CCR4+CCR6+)和Th2(CXCR3-CCR4+CCR6-)。


正常参考范围



节选自：Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition). Eur. J. Immunol. 2019. 49: 1457–1973

开心小松鼠

倪老师您是用什么软件分析的？

niwanmao

开心小松鼠 发表于 2021-2-18 18:09
倪老师您是用什么软件分析的？

上面这个图是文章里的。
我自己平时分析临床样本用Kaluza比较多，后续会改用自己编写的“流式智子”软件上实现自动化分析。
有时候会用免费的Flowing。

开心小松鼠

niwanmao 发表于 2021-2-18 18:54
上面这个图是文章里的。
我自己平时分析临床样本用Kaluza比较多，后续会改用自己编写的“流式智子”软件 ...

支持，希望 流式智子能够尽快普及

W3YC

倪老师，CD8+的Treg也可以用CD25和CD127标记吗？我看有的文章是CTLA4，可以用CD25和CTLA4直接标记所有的Treg吗

niwanmao

W3YC 发表于 2023-4-10 20:22
倪老师，CD8+的Treg也可以用CD25和CD127标记吗？我看有的文章是CTLA4，可以用CD25和CTLA4直接标记所有的Tre ...

CD8+ Treg 细胞主要以 CD45RO 表达为特征，缺乏 CD28、CD62L 或 CD122 表达， Foxp3 呈异质性。

W3YC

niwanmao 发表于 2023-4-10 21:29
CD8+ Treg 细胞主要以 CD45RO 表达为特征，缺乏 CD28、CD62L 或 CD122 表达， Foxp3 呈异质性。
...

谢谢倪老师！

wmj123456

niwanmao 发表于 2023-4-10 21:29
CD8+ Treg 细胞主要以 CD45RO 表达为特征，缺乏 CD28、CD62L 或 CD122 表达， Foxp3 呈异质性。
...

倪老师，如果按照CD4+CD25+CD127-的方式来分析CD8的Treg，从CD8+细胞里面设门出来，同时看CD25+CD127-，几乎是没有阳性的吗？

niwanmao

wmj123456 发表于 2023-4-19 12:08
倪老师，如果按照CD4+CD25+CD127-的方式来分析CD8的Treg，从CD8+细胞里面设门出来，同时看CD25+CD127-， ...

做CD8 Treg，还是用foxP3吧