只有直方图和散点图，怎么统计凋亡率？

yaya666

老师您好，直方图和散点图是课题组之前的人留下来的，原始数据丢失，现在也联系不到人，老师不希望数据浪费掉，所以想做一些补救，还请您不吝赐教。
问题：
1.图片是否是已经圈门之后的图？（因为看到散点图的横坐标是前向散射光，纵坐标是荧光值，这是否是对经过FSC和SSC圈选之后的细胞群的二次分析？）

2. 老师说希望根据散点图的密度来做一个大致的定量分析，看一看细胞凋亡的情况，老师说荧光染的肯定是凋亡，但具体没说，让我先找找有没有这样的技术？如果不能定量，定性是否可以呢？图片中细胞群的FSC值和荧光值的变化还是很明星的，这该怎么描述呢？

3. 看到网站上的《入门必看-流式细胞术原理与应用》PDF文档中，关于直方图可以算面积，如果我这图的直方图也算面积，是不是代表该荧光标记的细胞数量呢？如果荧光标记的是凋亡标志，数量的变化是否可以反应细胞凋亡的变化？

（ps.上传的附件是PNG格式，可能不太清晰，但是原始图片是tif格式的，很清晰。《入门必看-流式细胞术原理与应用》中有以PI染色的DNA为纵坐标FSC为横坐标的图，图注中说这样的图会有大量重叠，但是我们的图，FSC为横坐标，荧光为纵坐标，却几乎没有明显的重叠，这可以说明在我们的数据中FSC足以将细胞区分开吗？如果可以，能不能根据对照组划十字线，区分正常细胞和凋亡细胞呢？）

niwanmao

要分析，还是得找FCS文件。

从你这里提供的图看，可能是用Annexin V 染色测凋亡的，这样的染色测凋亡是不准确的，所以还是建议重复，用Annexin V FITC+PI双染做。

yaya666

niwanmao 发表于 2021-2-8 13:26
要分析，还是得找FCS文件。

从你这里提供的图看，可能是用Annexin V 染色测凋亡的，这样的染色测凋亡是不 ...

谢谢倪老师，现在问题是这样的，实验后面会重新做更完善的，只是希望在这批数据里面找到一些有用的东西，不然就都浪费掉了，就只分析已有的信息可以吗？

niwanmao

yaya666 发表于 2021-2-8 15:11
谢谢倪老师，现在问题是这样的，实验后面会重新做更完善的，只是希望在这批数据里面找到一些有用的东西， ...

浪费不浪费，其实主要看数据是否有效，这里的检测方法已经无效了，你再在里面挖掘，反而是对精力和时间的浪费。