treg有没有做出来

wwv · 发表于 2021-3-10 18:07:33

不知道怎么上传FCS文件，只能截图啦。
仪器是自产流式细胞仪，实验样本为门诊全血，没有设同型对照，也没有做单染管，数据没有补偿，CD4+细胞收集了5000个。问题1：不知道这样的图是不是做出来了，感觉没办法圈出来treg，抗体是否染上了
问题2：在CD4+细胞里CD127是不仅仅有低表达吗？也存在高表达？用CD4和CD127做图，能看到两个群
问题3：是否需要设置单染管、同型对照？
问题4：如果要设置单染管，CD25表达少，如何做单染管？CD127在除CD4+细胞外，在其他细胞也有表达，这个单染要怎么做？

样本1：

样本2

样本3：

niwanmao · 发表于 2021-3-10 19:43:59

FCS文件是通过编辑器的“附件”按钮上传的。

这几个图感觉是坐标没有调好，可以将FCS传上来看看。

wwv · 发表于 2021-3-12 15:34:30

谢谢倪老师，FCS文件不能直接上传，麻烦老师帮忙分析一下

样本1.rar (3.27 MB, 下载次数: 15)

样本2.rar (3.58 MB, 下载次数: 13)

样本3.rar (3.24 MB, 下载次数: 13)

niwanmao · 发表于 2021-3-12 20:56:47

wwv 发表于 2021-3-12 15:34
谢谢倪老师，FCS文件不能直接上传，麻烦老师帮忙分析一下

哦，你们是唯公生物的，这个结果还行啊：

wwv · 发表于 2021-3-13 10:04:48

niwanmao 发表于 2021-3-12 20:56
哦，你们是唯公生物的，这个结果还行啊：

您这张图也是没有加过补偿的吗？之前您说我的坐标没有调好，那应该要怎么调整会比较好圈门？散点图看不出来treg和其他细胞的分界不是很明显，所以不确定怎么准确圈出来treg

niwanmao · 发表于 2021-3-13 10:50:39

wwv 发表于 2021-3-13 10:04
您这张图也是没有加过补偿的吗？之前您说我的坐标没有调好，那应该要怎么调整会比较好圈门？散点图看不出 ...

补偿基本没调过。
主要是坐标。你有没有发现flowjo的坐标最小值是根据你数据里面数据点的最小值定的，所以这就容易受到极值的影响，实际上，好的流式软件，应该能够根据绝大多数细胞的较小值定义坐标轴最小值。

wwv · 发表于 2021-3-13 12:52:49

niwanmao 发表于 2021-3-13 10:50
补偿基本没调过。
主要是坐标。你有没有发现flowjo的坐标最小值是根据你数据里面数据点的最小值定的，所 ...

哦，还真是这样，好的，谢谢

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