体外培养刺激CFSE标记的PBMC，流式图如何圈门？

shunlifasci · 发表于 2021-4-6 00:32:11

本帖最后由 shunlifasci 于 2021-4-6 00:40 编辑

各位老师好，前一阵子在做PBMC刺激培养、用CFSE标记检测细胞增殖。刺激条件：anti-CD3/CD28培养PBMC，5d后上流式，上机染色抗体CD45/CD3/CD8。
我的实验是想看不同浓度药物对T细胞增殖是否有影响？

有一个样本，如下，我圈红的就是不知道应该如何画门，有两种圈门方式，见附图1和附图2中，其中CD45/SSC这个级图，不知道应该画哪一个，从下级图（CD45/CD3）看似乎都可以，但是对我后续CFSE结果影响甚大。所以请教老师，这两种圈门方式，哪个是准确的？我之所以不确定，就是因为这两种圈门方式的下一级图，即CD45+CD3+图，看上去两个好像都对，但再往下的CFSE分析相差甚远！！！我懵逼了！

我发现，对于刺激后的细胞，圈门总是存在问题，困惑！

shunlifasci · 发表于 2021-4-6 00:38:15

另外,CFSE图形展示，我是自己自认为那么画图。说实话，我都不知道我画的CFSE对不对。比如选中CF45+CD3+门，点进进去后，直接把横坐标改成CFSE纵坐标改成histgram，我理解这就代表CD3+细胞的增殖结果图。这样对嘛？（好捉急啊，没人教，自己找的资料也没讲清）
还有，我这个图，是不是CD8补偿没调好，我还不会调补偿，太难了QAQ

niwanmao · 发表于 2021-4-6 07:40:49

shunlifasci 发表于 2021-4-6 00:38
另外,CFSE图形展示，我是自己自认为那么画图。说实话，我都不知道我画的CFSE对不对。比如选中CF45+CD3+门， ...

FCS文件传上来看看。感觉补偿没调到位，然后设门也是存在问题的。

shunlifasci · 发表于 2021-4-6 09:12:54

谢谢老师。请您帮忙看一下，感谢。
原始文件（好像不能直接上传FCS文件，我压缩了一下）

shunlifasci · 发表于 2021-4-6 09:13:41

niwanmao 发表于 2021-4-6 07:40
FCS文件传上来看看。感觉补偿没调到位，然后设门也是存在问题的。

补偿也有问题啊，设门也有问题，那我还分析个啥，暂时先不分析了，等这些问题解决吧

shunlifasci · 发表于 2021-4-7 10:01:53

niwanmao 发表于 2021-4-6 07:40
FCS文件传上来看看。感觉补偿没调到位，然后设门也是存在问题的。

老师，请您帮忙看一下呢，已上传FCS文件，谢谢

GoodMaoning · 发表于 2023-1-16 12:08:21

niwanmao 发表于 2021-4-6 07:40
FCS文件传上来看看。感觉补偿没调到位，然后设门也是存在问题的。

倪老师，我想请教一个问题，在分析T细胞增殖的时候，要先去除死细胞吗

niwanmao · 发表于 2023-1-16 12:16:11

GoodMaoning 发表于 2023-1-16 12:08
倪老师，我想请教一个问题，在分析T细胞增殖的时候，要先去除死细胞吗

已在其它帖中跟您讨论了：
分析T细胞增殖的时候，是否需要去除死细胞
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-10278-1-1.html
(出处: 流式中文网)

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