磁珠分选的CD4+CD25+CD127low细胞体外扩增

wuxiu5600

由于实验需要，需要扩增大量nTreg细胞，用StemCell的磁珠分选试剂盒分选CD4+CD25+CD127low细胞后，体外进行扩增，扩增之后Foxp3表达很低，只有30%左右，扩增条件：细胞和beads比例为1:4，IL-2为100 IU，Rapamycin 100 nM, 刺激八天后，去掉磁珠rest 4天，然后再刺激，总共三轮共扩增36天，细胞数量是多了，但Foxp3表达不高，请问怎么样才能提高Foxp3的表达量？谢谢。

niwanmao

我没实际操作过，根据检索到的资料，美天旎的技术手册上，是提到由于在这类扩增条件下，常规T增殖高于Treg，所以导致最后foxP3+Treg比例不高。 要知道，之前分选出的CD4+CD25+CD127low本来就包含了一些常规T。

美天旎也提到了他们专门的扩增培养基，应该是他们专门设计的，可考虑用他们的看看。
Application note - Human CD4 CD25 regulatory T cell isolation, in vitro expansi.pdf (391.06 KB, 下载次数: 32)

2021-4-9 13:51 上传

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lalasa

想请教下楼主，您磁珠分选后的Treg纯度有多少呢？我也遇到了类似的问题，刚刚磁珠分选完测CD4+CD25+Treg纯度大概有60%，养了3天后纯度下降只有不到30%，CD4+CD25-的细胞扩增污染了原本的Treg，这个问题得不到解决，我也很苦恼，想跟你探讨

wuxiu5600

lalasa 发表于 2021-5-13 13:57
想请教下楼主，您磁珠分选后的Treg纯度有多少呢？我也遇到了类似的问题，刚刚磁珠分选完测CD4+CD25+Treg纯 ...

因为每次分选出来的Treg比较少（不到100万），都用来扩增了，没有测纯度。个人感觉刚分出来纯度60%是偏低了，建议还是先优化一下分选条件，还有扩增的时候加雷帕霉素抑制非Treg细胞增殖。