肿瘤部位细胞提取

13762680220 · 发表于 2021-5-18 11:19:44

流式小白，目前的课题需要用到流式分析T细胞，目前课题组提取肿瘤细胞是直接捣碎然后过滤收集，没有消化。流式上面淋巴细胞的分群不明显，CD4、CD8标记后荧光感觉也分不开，都不知道有没有染上（1.5微染的，细胞量不知道有多少，300微的总体积）通道是BL1和YL1，基本上没有调补偿，想知道问题出在哪。

niwanmao · 发表于 2021-5-18 16:58:12

抗体用量过少，染色体积过大。所以结果肯定很差。

首先建议一开始的时候，可先用全量，100ul体积先试。如果能做出结果，再进行滴定优化抗体用量。

13762680220 · 发表于 2021-5-18 20:06:32

niwanmao 发表于 2021-5-18 16:58
抗体用量过少，染色体积过大。所以结果肯定很差。

首先建议一开始的时候，可先用全量，100ul体积先试。如 ...

好的好的，谢谢老师

yuqzhuo@163.com · 发表于 2021-5-20 14:00:09

可以先用分离液富集一下免疫细胞呀

zxy714142006 · 发表于 2021-5-29 08:46:06

感觉还是需要消化，我们消化以后提取的还行，T细胞也能分群

zxy714142006 · 发表于 2021-5-29 08:47:34

zxy714142006 发表于 2021-5-29 08:46
感觉还是需要消化，我们消化以后提取的还行，T细胞也能分群

不过我们买的抗体说明书上写的多少微升/test，就直接按照那个量加的

CART · 发表于 2021-9-2 22:19:34

确实需要消化，最好还能配上专用的解离机器，比如美天旎的机子，国产的也行

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